一氧化氮对豚鼠耳蜗血管纹微血管内皮细胞通透性调控的初步研究

摘要

本文通过TNF诱导产生NO，研究NO对豚鼠耳蜗血管纹微血管内皮细胞通透性影响的特征及分子机理，为临床调控血迷路屏障通透性提供理论依据。 方法：参照本实验室的方法，体外分离、培养豚鼠耳蜗血管纹微血管内皮细胞并建立耳蜗血管纹微血管内皮细胞通透性体外模型。实验分为TNF组、TNF+L-Arg组及TNF+L-NMMA组，各组中又根据作用时间和浓度的不同作相应的分组，检测其对伊文氏兰通透率的变化，并与兔肺微血管内皮细胞通透性进行比较，最后用免疫荧光法检测各组其中的耳蜗血管纹微血管内皮细胞F-actin的含量变化。 结果：1.豚鼠耳蜗血管纹组织块经Ⅰ型胶原酶消化，培养24小时可见部分细胞贴壁伸展，呈短梭形或长圆形。7天后，培养瓶内出现多个由短梭形或钝圆形细胞呈“铺路石状”排列形成的细胞岛，经过反复多次纯化，细胞形态趋于一致，为短梭形或钝圆形细胞。细胞排列致密时，细胞间隙消失，彼此融合形成致密融合的细胞单层，呈现典型的“铺路石”样外观。所培养的细胞经免疫组织化学法鉴定，99％以上胞浆内均具有内皮细胞特有的Ⅷ因子抗原，提示为内皮细胞。 2.肿瘤坏死因子能明显增加耳蜗血管纹微血管内皮细胞的通透性，使伊文氏兰的通透率显著升高(P＜0.01)，且随着肿瘤坏死因子浓度的升高和时间的延长，伊文氏兰的通透率明显增加。 3.在肿瘤坏死因子的作用下，NO供体L-精氨酸能进一步显著的增加耳蜗血管纹微血管内皮细胞的通透性，使伊文氏兰的通透率显著升高(P＜0.01)，且随着L-精氨酸浓度的增加对伊文氏兰的通透率明显增加。 4.在肿瘤坏死因子的作用下，NO抑制剂L-单甲基精氨酸能显著的降低耳蜗血管纹微血管内皮细胞的通透性，使伊文氏兰的通透率显著减少(P＜0.01)，且随着L-单甲基精氨酸浓度的增加对伊文氏兰的通透率明显下降 5.在相同的处理因素下，耳蜗血管纹微血管内皮细胞与兔肺微血管内皮细胞通透性比较，对伊文氏兰的通透率，前者明显低于后者(P＜0.01)。 6.肿瘤坏死因子能使耳蜗血管纹微血管内皮细胞的F-actin的含量明显减少(P＜0.01)，且肿瘤坏死因子的浓度越高F-actin的含量降低的越明显。L-精氨酸能够进一步的降低F-actin的含量(P＜0.05)，变化与浓度成反比，而L-单甲基精氨能够抑制这种趋势(P＜0.05)，变化与浓度成正比。 结论：1.TNF作为一种炎症刺激因子能够诱导耳蜗血管纹微血管内皮细胞中的NOS产生NO，对血迷路屏障通透性起调控作用。 2.耳蜗血管纹微血管内皮细胞中含有的NOS在病理情况下产生NO是影响耳蜗血管纹微血管内皮细胞通透性的一个重要因素。NO供体和NO阻滞剂的运用能够调节耳蜗血管纹微血管内皮细胞的通透性，为临床调控血迷路屏障提供了可靠的依据。 3.F-actin密度的改变引起的细胞间连接的变化是导致耳蜗血管纹微血管内皮细胞通透性改变的一个重要因素。

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结 果

讨 论

结论

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文献综述一氧化氮对微血管通透性调控的研究