氧合血红蛋白对血管平滑肌细胞和成纤维细胞的影响及蜕皮甾酮的干预效应

摘要

背景：蛛网膜下腔出血诱发的慢性脑血管痉挛(chroniccerebralvasospasm,CVS)是SAH致死或致残的主要原因。CVS发生的病因和机理研究已持续了数十年，至今尚未完全阐明。实验和临床研究表明，针对脑血管平滑肌持续收缩的药物治疗措施只能在早期或一定程度上改善CVS，对于后期或已形成的严重的CVS均无法缓解。大量研究发现SAH患者尸检和实验性SAH的动物模型中均存在痉挛的血管肌层坏死、增生，血管壁明显增厚并伴有血管平滑肌细胞(vascularsmoothmusclecells，VSMC)过度增殖等改变。有证据表明血管外膜成纤维细胞(Vascularadventialfibroblasts，VAF)在CVS后血管重构的发生和发展中也发挥了重要作用，但具体的机制尚不清楚。以往的大量研究工作主要是围绕VSMC持续收缩进行的，对血管壁损害后血管壁细胞的增殖、迁移、凋亡等生物学特性的改变并未引起广泛重视，且主要是通过在体动物模型进行观察，研究结果往往差异较大而存在争论。 目的：通过原代分离培养的大鼠主动脉VSMC和VAF，采用氧合血红蛋白(oxyhemoglobin，OxyHb)模拟SAH刺激因素，观察VSMC、VAF的病理形态学和增殖、迁移、凋亡、[Ca2+]I的变化，及相应的OxyHb作用VAF后的条件培养液对VSMC增殖状态的影响。在上述环节观察活血化瘀中药牛膝的有效成分蜕皮甾酮(Ecdysterone，EDS)的效应，并初步探讨T型钙通道在SAH中的意义，从而加深对CVS发病机制和病理基础的认识。 方法：1.体外分离培养获得较纯净大鼠主动脉VSMC和VAF，并通过免疫细胞化学染色鉴定。 2.通过病理形态学、细胞计数、MTT检测、流式细胞术周期、划痕实验、transwell小室实验、凋亡分析和激光共聚焦检测等方法评估OxyHb对VSMC、VAF的影响；并观察EDS在上述环节的效应。 3.采用RT-PCR检测正常及OxyHb作用后VSMCT型钙通道α1亚基不同亚型mRNA的表达；并初步建立VSMCT型钙通道单通道电流的膜片钳检测方法。 4.通过MTT检测观察相应的VAF条件培养液对VSMC的促增殖效应。 结果：1.OxyHb对体外培养VSMC的影响受其浓度影响，高浓度主要表现为细胞损害、坏死和或凋亡，抑制迁移；而低浓度则更多的表现为一种刺激增殖、迁移的作用；OxyHb还可引起[Ca2+]I升高，VFC受OxyHb作用后其条件培养液对VSMC促增殖作用增强，EDS对VSMC上述改变具有保护作用。 2.OxyHb对VAF的损伤程度明显轻于VSMC，1-100umol/1OxyHb更多的表现为促进增殖及迁移，其作用存在量效关系；200umol/1OxyHb主要是促进细胞坏死及凋亡；所有浓度OxyHb作用下[Ca2+]I均升高，EDS对VSMC上述改变具有保护作用。 3.VSMC表达有T型钙通道α1亚基的G及Ⅰ亚型，G亚型表达略高于Ⅰ亚型，OxyHb作用下T型钙通道α1亚基的表达趋于增加；所建立的膜片钳检测方法能够有效的记录VSMC的T型钙通道单通道电流。 结论：1.OxyHb影响体外培养的VSMC的增殖、凋亡、迁移、[Ca2+]I等特性，其作用存在量效关系，OxyHb刺激后的VFC条件培养液对VSMC促增殖作用增强，OxyHb作用下VSMC可能处于增殖、凋亡的动态失衡过程中。 2.OxyHb对体外培养的VAF作用主要表现为促进增殖、迁移、[Ca2+]I升高，其作用存在量效关系。 3.体外培养的大鼠主动脉VSMC表达有T型钙通道α1亚基的G及Ⅰ亚型，OxyHb作用可能影响其表达。 4.EDS对OxyHb作用下的VSMC、VAF存在影响，其表现了较强的抑制VSMC、VAF增殖、迁移、[Ca2+]I升高及促凋亡的效应。

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摘要

前言

第三部分 氧合血红蛋白对血管平滑肌细胞T型钙通道α1亚基不同亚型表达及电生理功能影响的初步研究

全文小结

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文献综述 钾通道与蛛网膜下腔出血(SAH)后脑血管痉挛

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