乳腺癌淋巴结转移、微转移和孤立肿瘤细胞状态下PTEN、MMP-9和CD4/CD8表达及其意义

摘要

区域淋巴结转移状态是乳腺癌临床分期和决定辅助治疗方案的重要依据之一，同时又是判断乳腺癌预后最重要的独立因素。在AJCC《癌症分期手册》第六版分期中将区分微转移与孤立肿瘤细胞的标准进行了重新界定：微转移是指转移灶直径超过0.2mm，但是不大于2mm，并且有组织学证据证明其具有恶性活性(增殖或者间质反应)；孤立肿瘤细胞(ITCs)是指最大直径不大于0.2mm的单个肿瘤细胞或者肿瘤细胞团，通常没有组织学证据证明其具有恶性活性(增殖或者间质反应)。乳腺癌的区域淋巴结转移的发展过程是从孤立肿瘤细胞到微转移，再形成淋巴结内广泛转移。这一发展过程中单个肿瘤细胞或者肿瘤细胞团如何克服周围淋巴细胞的影响生长和发展的机制尚不清楚，其在临床上的意义亦有争议。有人发现在无远处转移且常规染色没有发现转移的乳腺癌病人当中，通过免疫组化的方法，15％-90％病人区域淋巴结可检测出孤立肿瘤细胞。有研究者认为这个发现是与临床相关的预后指示因素之一，可作为选择辅助治疗的标准和评价辅助治疗疗效的指标。但不少其他作者认为乳腺癌区域淋巴结内的单个肿瘤细胞或者肿瘤细胞团部分可能不具有生物学意义，其临床价值有待进一步研究。Dowlanthshahi指出淋巴结微小转移灶对生存的影响需大样本和经10年以上的随访才能显现出来。 PTEN基因是继p53基因之后，另一改变较为广泛的、与肿瘤发生发展密切相关的抑癌基因。PTEN抑制肿瘤发生的功能主要是依靠脂质磷酸酶的活性，后者是磷酸肌醇通路的脂质脱磷酸，干扰PKB/Akt信号转导。 基质金属蛋白酶(Matrixmetalloproteinascs，MMPs)是锌离子依赖的内分泌蛋白酶。MMPs主要由体内单核细胞、组织中的巨噬细胞和相关的组织细胞等多种细胞分泌，它可以降解基底膜中的许多蛋白成分，而这些物质正是肿瘤细胞侵袭转移的屏障，如胶原、层粘连蛋白和纤维连接蛋白等，所以MMPs是一类与肿瘤的侵袭和转移关系十分密切的蛋白水解酶。MMP-9是其中重要的一员，它以酶原的形式分泌，被激活之后，形成IV型胶原酶，降解、破坏靠近肿瘤表面细胞外基质的IV、V型胶原和明胶，然后肿瘤细胞沿着缺失的基底膜向周围组织浸润，最终导致肿瘤的侵润和转移。 CD4+细胞(T辅助细胞、Th细胞)主要通过分泌细胞因子及表面分子调节其他细胞的活性，对免疫反应的启动、最终表现形式和强弱起关键作用。除此之外，CD4+淋巴细胞还引起T淋巴细胞自身的无反应性以及激活B淋巴细胞，促进体液免疫的发生。CD8+T细胞为Tc细胞，即CD8+杀伤性T细胞，又称细胞毒性T淋巴细胞(CTL)。Tc细胞是肿瘤细胞的杀伤作用的重要效应细胞。可特异性杀伤靶细胞.其杀伤方式是使靶细胞裂解和凋亡。在杀伤靶细胞的过程中，Tc细胞自身不受损伤，可反复杀伤多个靶细胞。CD4+T细胞/CD8+T细胞比值可反映出机体的细胞免疫功能状态。 本研究拟通过观察乳腺癌腋窝淋巴结中单个肿瘤细胞或者肿瘤细胞团、微转移肿瘤细胞和明显肿瘤细胞转移时PTEN基因蛋白、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的表达变化以及转移肿瘤周围CD4+T细胞/CD8+T细胞数量和比值变化，探讨其在乳腺癌腋窝淋巴结中从单个肿瘤细胞或者肿瘤细胞团到微肿瘤细胞转移和明显肿瘤细胞转移发展过程中的意义。 研究对象和方法： 收集2005年6月～2006年3月在西南医院乳腺中心住院手术的女性乳腺癌病人92例，年龄23岁～72岁，平均46.08±9.96岁。共收集淋巴结293枚。首先对常规HE染色阴性的乳腺癌患者腋窝淋巴结，运用免疫组化的方法（S-P法)行细胞角蛋白19(CK19)以及肌动蛋白染色，筛选出含有微转移、孤立肿瘤细胞的淋巴结。对筛选出的淋巴结行PTEN、MMP-9、CD4及CD8染色，观察不同转移情况下PTEN、MMP-9、CD4及CD8的表达情况，并在40X显微镜下对CD4+T淋巴和CD8+T淋巴细胞进行记数，以细胞膜出现棕褐色或棕黄色为阳性，记数200个细胞中的阳性细胞数。 主要结果： 1.通过CK19免疫组化染色观察，所有293枚淋巴结中，无转移的淋巴结为145枚(49.49％)，有明显转移的为84枚(28.67％)，有微转移的为42枚(14.33％)，孤立肿瘤细胞为22枚(7.51％)；通过平滑肌肌动蛋白的免疫组化染色，结果显示所有明显转移灶周围均有肌动蛋白表达，34枚(80.95％)含有微转移的淋巴结中微转移灶周围有肌动蛋白表达； 2.PTEN在84枚含有明显转移的淋巴结中均呈低表达，在38枚含有微转移的淋巴结中呈低表达，其余4枚未见PTEN表达；在所有84枚有明显转移的淋巴结中，MMP-9均呈阳性表达，其中66枚(78.57％)淋巴结高表达(+++)，18枚(21.43％)为中度表达(++)；42枚含有微转移的淋巴结中，1枚(2.38％)呈高表达(+++)，24枚(57.14％)淋巴结呈中度表达(++)，15枚(35.72％)淋巴结呈低表达(+)，2枚(4.76％)淋巴结无表达。22枚孤立肿瘤细胞中，3枚(13.64％)呈低表达，其余19枚(86.36％)淋巴结无表达。 3.CD4+细胞在有明显转移和无转移的淋巴结之间有明显差异(P＜0.05)，明显转移与微转移之间有明显差异(P＜0.05)；CD8+细胞在有明显转移、微转移及无转移淋巴结之间没有明显差异(P＞0.05)；CD4+T/CD8+T在无转移和含有微转移淋巴结之间无明显差异(P＞0.05)，无转移和有明显转移之间有明显差异(P＜0.05)。 主要结论： 1.淋巴结内间质反应中肌动蛋白表达变化在乳腺癌细胞进入淋巴结发展为微转移灶及进一步发展为明显转移形成的过程中可能发挥重要的作用。 2.MMP-9的高表达和PTEN蛋白的低表达可能是促进淋巴结内肿瘤细胞生长和侵袭的重要原因。 3.肿瘤细胞可导致淋巴结癌转移灶局部CD4+T淋巴明显增多，导致CD4+T淋巴细胞/CD8+T淋巴细胞比值升高，提示机体在淋巴结局部对肿瘤细胞的免疫应答改变可能是肿瘤细胞得以发展的原因之一。

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文献综述：乳腺癌淋巴结内微转移、孤立肿瘤细胞及间质反应