Nanog-miR-200c通路在调控结肠癌EMT转化中的作用及其临床病理学意义

摘要

目的:
　　结肠癌在癌症致死率中高居第三位，其代表着癌症治疗的巨大挑战。EMT（上皮间充质转化）在恶性肿瘤（例如乳腺癌、结肠癌、前列腺癌）的发生机制中广泛存在。Nanog作为重要的干性转录因子，其与结肠癌干细胞的干性、自我更新能力的调控密切相关。同时，miRNAs也可以维持胚胎干细胞与肿瘤细胞的干性，在EMT可塑性的调控机制方面发挥关键作用。本研究旨在在结肠癌中探讨Nanog与miR-200c重要的相关性，Nanog是如何调节miR-200c的具体机制有待进一步研究。
　　方法及结果:
　　在临床样本水平，我们收集49例结肠癌患者的癌组织及其癌旁组织，通过实时定量PCR对这些组织中miR-200c与miR-141的表达水平进行检测，分析miR-200c与miR-141在结肠癌组织中的改变情况。联合定量miR-200c/141的表达，分析其与患者临床病理学特征之间的相关性、在患者术后1年预后方面的意义。结果显示:结肠癌组织中miR-200c/141表达水平较其相对应的癌旁组织的表达量显著降低。其中，miR-141表达量与肿瘤大小和淋巴结转移存在负相关(P＜0.05)。无淋巴结转移或临床早期的结肠癌患者其miR-141的表达量明显高于有淋巴结转移或临床晚期患者的表达量。在肿瘤大小方面，miR-200c/141的表达量与肿瘤大小之间存在明显的相关性（P＜0.05）。但在患者术后1年的生存率方面，miR-200c/141的表达量无明显的预后意义（P＞0.05）。在细胞学水平，对结肠癌细胞株SW480和LS174T进行Nanog过表达慢病毒转染，采用嘌呤霉素梯度筛选并建立稳定转染的细胞株，通过Real-time PCR和Western blot实验观察结肠癌细胞株Nanog过表达转染后对miR-200c的影响，并确立两者相关性。对结肠癌细胞HT-29和HCT116进行siRNA/Nanog干扰，并通过Real-time PCR和Western blot实验观察对结肠癌细胞株的Nanog表达情况的影响，以及后续对miR-200c的影响，结果显示:进行Nanog过表达慢病毒转染后，Real-time PCR检测发现，SW480和LS174T细胞中Nanog表达量显著增加，miR-200e表达量显著降低;Western blot实验结果显示，过表达慢病毒转然后SW480和LS174T细胞中Nanog表达量显著高于未转染及转染对照病毒的SW480和LS174T细胞。对Nanog干扰实验结果显示:结肠癌细胞株中Nanog表达量显著下降，而miR-200c的表达量呈上升趋势。Real-time PCR和Western blot联合检测发现，Nanog和miR-200c呈负相关(P＜0.05）。
　　结论:
　　在结肠癌组织样本中表达下调的miR-200c/141与肿瘤大小，淋巴结转移、临床分期等相关。在细胞学水平，Nanog过表达慢病毒转染后SW480和LS174T中miR-200c表达量下降，Nanog干扰后HT29和HCT116细胞中miR-200c的表达量增加，因此，Nanog与miR-200c呈负相关，Nanog与miR-200c之间的具体调控机制尚待深入研究。

目录

声明

英文缩略词表

摘要

第一章 前言

第二章 材料与方法

2．1 实验材料

2．2 实验方法

第三章 结果

第四章 讨论

全文结论

参考文献

文献综述 MiR-200在肿瘤发生发展中的关键作用

在读硕士研究生期间发的论文

致谢