独子藤中雷公藤红素的提取及纯化工艺研究

摘要

独子藤(Celastrus monospermusRoxb.)是卫矛科南蛇藤属常绿藤本植物，主要含生物碱和三萜类化学成分，而木栓烷型三萜类化合物又是其中一个重要的组成部分。该化学成分具有多种生物活性。雷公藤红素(Celastrol)是天然木栓烷型三萜类化合物,具有抗肥胖、抗肿瘤、抗炎、抗氧化、抗风湿、免疫抑制等多种药理活性。本文对独子藤中雷公藤红素的提取及纯化工艺进行了研究，该研究对雷公藤红素的开发利用和新药研发具有重要意义。
　　1.建立了独子藤中雷公藤红素的HPLC含量测定方法，色谱条件为：反相C18色谱柱（Discovery,25cm×4.6 mm,5μm。Supelco.），流动相为甲醇-0.1％磷酸水=88:12，流速1 mL?min-1，检测波长425 nm，柱温30?C，进样量20μL。用外标法定量。
　　2.采用超声波提取法，通过单因素实验，考察了溶剂种类，溶剂浓度，提取时间，提取温度，超声功率和液料比对独子藤中雷公藤红素提取效果的影响。结果表明，分别当提取溶剂为无水乙醇，提取时间为20 min,提取温度45?C，超声功率75 W，液料比为20 mL/g的时候雷公藤红素的提取效果最好。
　　3.采用Box-Behnken Design设计实验方案，通过响应面法，进一步考察了提取时间，提取温度，超声功率和液料比对雷公藤红素提取率的影响，优化得到最佳提取工艺为以无水乙醇为提取溶剂，提取时间为20 min,提取温度为46?C，超声功率为60 W和液料比为30 mL/g，得到雷公雷红素的提取率3.116mg/g。
　　4.根据雷公藤红素的性质，确定了雷公藤红素的纯化工艺。经过预处理后的样品，首先进行聚酰胺（60-100目）柱层析，洗脱剂为甲醇:水=3:1，收集雷公藤红素馏分，浓缩得到红色粉末。所得红色粉末进行硅胶（200-300目）柱层析，洗脱剂为石油醚乙酸乙酯系统，洗脱梯度为5:1，2:1，1:1，点板收集雷公藤红素馏分，浓缩得深红色粉末，纯度不低于92%。深红色粉末再进行凝胶柱层析，洗脱剂为甲醇，流速为30 mL/h。经过三次柱层析，得到纯度大于98%的雷公藤红素。

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第一章 前言

1.1 独子藤简介

1.2 独子藤药材中化学成

1.3 雷公藤红素研究现状和进展

1.3.1 雷公藤红素的理化性质和结构

1.3.2 雷公藤红素的资源分布

1.3.3 雷公藤红素的药理作用

1.3.4 雷公藤红素的分离制备及提取纯化研究进展

1.3.5 新兴提取技术介绍

1.4 论文研究目的和意义

第二章 响应面优化超声辅助提取独子藤中雷公藤红素工艺考察

2.1雷公藤红素的定性定量方法

2.1.1雷公藤红素定性分析方法

2.1.2雷公藤红素定量分析方法

2.2 独子藤中雷公藤红素超声提取工艺单因素考察

2.2.1 主要仪器和试剂

2.2.2 溶剂种类的考察

2.2.3 溶剂浓度的考察

2.2.4 超声功率的考察

2.2.5提取液料比的考察

2.2.6 提取温度的考察

2.2.7 提取时间的考察

2.2.8 单因素考察结论分析

2.3响应面优化雷公藤红素提取工艺考察

2.3.1主要仪器和试剂

2.3.2 Box-Behnken实验方案设计

2.3.3回归方程的构建和方差分析

2.3.4 响应曲面分析

2.3.5 最佳提取工艺的确定

2.3.6 最佳提取工艺验证实验

2.3.7 结论

2.4 本章小结

第三章 独子藤中雷公藤红素的纯化工艺考察

3.1 主要仪器和试剂

3.2 样品预处理工艺考察

3.2.1 水-乙酸乙酯萃取

3.2.2 水-二氯甲烷萃取

3.2.3 水-氯仿萃取

3.2.4 水-石油醚-乙酸乙酯萃取

3.2.5 水-石油醚-二氯甲烷萃取

3.2.6 水-石油醚-氯仿萃取

3.2.7 预处理实验结果

3.3 柱层析工艺考察

3.3.1柱层析简单介绍

3.3.2 聚酰胺柱层析工艺考察

3.3.3 硅胶柱层析工艺考察

3.3.4 凝胶柱层析纯化工艺考察

3.4 本章结论

第四章 全文结论

展望

参考文献

硕士在读期间已（或待）发表论文

致谢

附图