Cajal间质细胞及P物质在大鼠脊髓损伤后肠功能障碍中的作用

摘要

目的:
　　脊髓损伤(Spinal cord injury，SCI)可致患者感觉、运动功能丧失，自主神经功能障碍。在自主神经功能障碍中，肠功能障碍严重影响患者的生活质量，被认为是需要最优先、迫切解决的问题之一。既往研究显示，脊髓损伤后肠功能障碍与神经递质-P物质的变化有关，但是否存在其受体的变化并不清楚。另外，Cajal间质细胞(interstitial cells of cajal，ICC)作为胃肠道慢波的起搏细胞，与胃肠电活动传播、神经递质传递等密不可分，它是否参与脊髓损伤后肠功能障碍的发生尚未见报道。因此，通过动物实验来研究脊髓损伤后肠功能障碍中P物质及其受体NK1R以及ICC的变化十分必要。在成功建立脊髓损伤模型的基础上，观察大鼠脊髓损伤后脊髓及结肠组织的病理变化;检测脊髓损伤后结肠生物电活动以及ICC的变化;研究脊髓损伤后脊髓及结肠组织中P物质及其受体的变化，进一步探讨脊髓损伤后肠功能障碍的形成机制。
　　方法:
　　1.大鼠脊髓损伤模型的建立。采用改良Allen装置以10g·25cm强度打击大鼠T10硬脊膜，建立大鼠脊髓损伤模型。
　　2.行为学检测。以正常组大鼠为参照，采用BBB评分观察大鼠行为学变化，通过比较筛选出造模后BBB评分为“0-1”的大鼠进行实验。
　　3.一般观察。以假手术组大鼠为参照，肉眼观察脊髓损伤后结肠的变化。
　　4.病理学观察。以正常组、假手术组大鼠为参照，对SCI后脊髓损伤组织行EC染色，对SCI后大鼠近端结肠组织行HE染色，观察其病理变化特点。
　　5.结肠生物电活动检测。以正常组、假手术组大鼠为参照，利用生物电记录仪检测SCI后1周、2周、4周大鼠近端结肠生物电活动变化。
　　6.ICC检测。以正常组、假手术组大鼠为参照，利用免疫荧光、Western Blot检测SCI后1周、2周、4周大鼠结肠组织中ICC的变化。
　　7.P物质及其受体NK1R检测。以正常组、假手术组大鼠为参照，利用免疫荧光双标、Western Blot分别检测SCI后1周、2周、4周大鼠脊髓和结肠组织中P物质及其受体NK1R的变化。
　　结果:
　　1.行为学检测:BBB评分:脊髓损伤后大鼠BBB功能评分为0-1分，提示脊髓损伤后大鼠双下肢完全瘫痪。
　　2.一般观察:脊髓损伤后结肠组织充血、水肿明显，肠腔内可见较多干结粪粒。
　　3.病理学观察:(1)EC染色:正常组、假手术组中大鼠脊髓白质髓鞘分布均匀，排列紧密;损伤组大鼠脊髓损伤处白质脱髓鞘明显，局部空洞形成。(2)HE染色:正常组、假手术组大鼠近端结肠绒毛上皮细胞排列整齐;损伤组大鼠近端结肠绒毛上皮细胞倒伏、脱落，粘膜层及肌层的厚度增加。
　　4.结肠生物电活动检测:正常组、假手术组大鼠近端结肠生物电活动较规律;损伤组近端结生物电紊乱，振幅变异较大，且波形较不稳定。
　　5.ICC检测:脊髓打击损伤1周时结肠组织内Cajal间质细胞阳性细胞数目为57.38±4.69，较正常组、假手术组明显减少(P＜0.01）;损伤2周时结肠组织内Cajal间质细胞阳性细胞数目为32.26±3.62，与正常组和假手术相比，其阳性细胞数明显减少(P＜0.01）;损伤4周时结肠组织Cajal间质细胞阳性细胞数目为25.07±3.05，明显少于正常组、假手术组(P＜0.01)。脊髓打击损伤后结肠组织中c-kit蛋白表达呈现逐渐降低的趋势，其中，损伤4周时c-kit蛋白表达为0.409±0.117，与正常组相比，其表达量明显减少(P＜0.01）。
　　6.P物质检测:打击损伤组1周时脊髓损伤上段前角P物质表达为0.158±0.060，与正常组、假手术组相比未见明显差别(P＞0.05）;2周时P物质在脊髓损伤上段前角表达为0.323±0.098，较正常组、假手术组明显增加(P＜0.01);4周时P物质在脊髓损伤上段前角表达为0.199±0.048，与正常组、假手术组相比未见明显差别(P＞0.05）。脊髓打击损伤1周时P物质在脊髓损伤下段前角表达为0.090±0.009，与正常组、假手术组相比有所减少(P＜0.05）;2周时P物质在脊髓损伤下段前角表达为0.280±0.027，明显高于正常组、假手术组(P＜0.01）;4周时脊髓损伤下段前角P物质表达为0.129±0.022，与正常组、假手术组相比未见明显差别（P＞0.05）。脊髓打击损伤1周后结肠组织P物质为0.239±0.091，与正常组、假手术组相比，P物质含量减少(P＜0.05);脊髓打击损伤2周时结肠组织P物质含量为0.233±0.056，较正常组、假手术组明显减少(P＜0.01）;脊髓打击损伤4周时结肠组织中P物质含量为为0.206±0.041，明显少于正常组、假手术组(P＜0.01)。
　　7.NK1R检测:大鼠脊髓损伤后，脊髓组织中NK1R表达随时相点变化呈现先减少后增加的趋势。其中，损伤1天时脊髓NK1R表达最低，为0.978±0.414;损伤28天时脊髓NK1R表达为1.771±0.685，与假手术组相比，差异有统计学意义(P＜0.05)。
　　结论:
　　1.大鼠脊髓损伤后结肠肠腔内可见较多干结粪粒;
　　2.大鼠脊髓损伤后脊髓损伤处白质脱髓鞘明显，局部空洞形成;
　　3.大鼠脊髓损伤后近端结肠绒毛上皮细胞倒伏、脱落，粘膜层及肌层的厚度增加;
　　4.大鼠脊髓损伤后结肠生物电活动改变;
　　5.大鼠脊髓损伤后结肠肌内ICC数目减少，c-kit蛋白表达降低;
　　6.大鼠脊髓损伤后脊髓前角、结肠肌内P物质及其受体NK1R改变明显。

目录

声明

缩略词表

摘要

第一章 前言

第二章 大鼠脊髓损伤后结肠功能变化研究

2．1 材料与方法

2．2 结果

2．3 讨论

2．4 小结

第三章 Cajal间质细胞在大鼠脊髓损伤后结肠组织中的变化及其作用

3．1 材料与方法

3．2 结果

3．3 讨论

3．4 小结

第四章 P物质／NK1R在大鼠脊髓损伤后脊髓及结肠组织中的变化及其作用

4．1 材料与方法

4．2 结果

4．3 讨论

4．4 小结

全文总结

参考文献

文献综述 脊髓损伤后肠功能障碍的研究进展

学习期间发表的文章

致谢