藏药鲁堆多吉有效成分含量的测定及其总皂苷对大鼠睾丸间质细胞影响的研究

摘要

目的:近年来,男性不育发生率逐年升高,生殖健康已成为科学研究的热点和重点。寻找安全有效、天然无害并具有调节生殖功能的物质对人类的生殖健康有重要意义。
　　 本研究以藏药鲁堆多吉(藏党参)--长花党参(Codonpsisthalictrifolia Wall.)为研究对象,测定了藏党参的总皂苷和总黄酮的含量,并对藏党参总皂苷如何影响睾丸间质细胞功能进行了初步探索研究,为藏党参的活性成分对雄性生殖功能的影响提供确定科学的实验数据。
　　 方法：利用单因素实验确定提取藏党参总皂苷的最佳提取方法,并比较藏党参和潞党参活性成分的差异;建立体外培养睾丸间质细胞的实验技术;利用高效液相色谱法测定睾丸间质细胞睾酮的分泌量以及cAMP含量;通过测定细胞内的MDA含量,SOD活力及GSH的含量,研究藏党参总皂苷对体外培养睾丸间质细胞的影响。
　　 结果：单因素实验确定当提取浓度达到80％,提取次数为3次时,藏党参总皂苷的得率最多。
　　 研究结果显示藏党参和潞党参总皂苷的含量分别是3.02％和2.48％,总黄酮的含量分别为0.0875％和0.0921％。
　　 睾丸间质细胞的培养实验中,通过台盼蓝排斥实验和睾酮的基础分泌都证明了本实验离体大鼠的睾丸间质细胞的功能良好,结果显示离体培养32h内细胞活率高达约98％。
　　 研究发现睾丸间质细胞的睾酮分泌量与藏党参给药浓度相关。在不同藏党参给药浓度实验中,随着给药浓度的增加睾酮分泌量增高,给药浓度为0.3mg/mL,0.4mg/mL时给药组均与空白对照组有显著差异(P＜0.05),之后随着给药浓度的增加睾丸间质细胞睾酮分泌量降低。
　　 在不同藏党参培养时间实验中,给药组分泌的睾酮含量均比空白组分泌的睾酮量高,而且1h,2h,4h,8h,16h,32h组均与空白对照组有显著差异(P＜0.05),4h组与空白对照组有极显著的差异(P＜0.01)。
　　 在睾丸间质细胞cAMP含量的测定结果显示随着给药浓度的增加,cAMP含量也逐渐增加,当给药浓度为0.4mg/mL时达到高峰,之后随着浓度的增加睾丸间质细胞cAMP含量降低。这个趋势与睾酮的分泌量正吻合。
　　 MTT比色法测定细胞增殖实验发现,藏党参总皂苷使细胞数量下降,但是睾酮的分泌量仍然增加。细胞群分泌睾酮的总量取决于有分泌功能的细胞数量和单个细胞的分泌能力两个方面,MTT比色法结果表明本实验中单个睾丸间质细胞的分泌能力有所增强。
　　 当藏党参总皂苷的给药浓度为0.4 mg/mL和培养时间为4h时,大鼠睾丸间质细胞的MDA的含量显著性降低(P＜0.05),SOD的活力降低(P＜0.01),谷胱甘肽的含量增加(P＜0.01)。
　　 结论：本研究实验结果表明,单因素提取条件得到的藏党参总皂苷的得率最多。
　　 藏党参总皂苷的含量高于潞党参总皂苷含量,而其总黄酮的含量略低于潞党参总黄酮。
　　 藏党参总皂苷低剂量促进睾丸间质细胞睾酮的分泌和cAMP的含量,高剂量抑制睾丸间质细胞睾酮的分泌和cAMP的含量,推测藏党参总皂苷通过cAMP影响睾丸间质细胞睾酮的分泌。
　　 藏党参总皂苷能降低睾丸间质细胞MDA的含量和SOD的活力,同时提高GSH的含量。推测藏党参总皂苷可能参与睾丸间质细胞自由基的清除,减少自由基对睾丸间质细胞的损伤。

目录

文摘

英文文摘

论文说明:缩略词

第一章 引言

一、研究现状及意义

二、藏党参植物来源

三、中医与藏医对党参调节生殖机能的阐释

四、党参属植物的化学成分

五、党参属植物的药理作用研究现状

六、党参属植物的临床研究

七、民族药与中药对雄性生殖系统的研究现状

八、睾丸间质细胞简介

九、睾酮分泌的机制

十、研究目标

第二章 实验材料

一、实验药材

二、实验试剂

三、实验动物

四、实验仪器

第三章 实验方法

一、藏党参总皂苷提取工艺的研究

二、总皂苷的提取

三、藏党参和潞党参总皂苷含量的测定

四、藏党参和潞党参总黄酮含量测定

五、大鼠睾丸间质细胞的体外培养

六、用高效液相色谱法测定睾酮含量

七、环磷酸腺苷(cAMP)含量的测定

八、MTT比色法实验

九、丙二醛(MDA)含量的测定

十、超氧化物歧化酶(SOD)活性的测定

十一、谷胱甘肽(GSH)含量测定

十二、数据统计分析

第四章 实验结果

一、醇的提取次数和提取浓度对结果的影响

二、藏党参和潞党参总皂苷的含量测定

三、藏党参和潞党参总黄酮含量测定

四、大鼠睾丸间质细胞的体外培养

五、大鼠睾丸间质细胞的分泌的睾酮含量

六、环磷酸腺苷(cAMP)含量测定

七、MTT比色法

八、藏党参总皂苷对睾丸间质细胞的丙二醛(MDA)含量的影响

九、藏党参总皂苷对睾丸间质细胞的超氧化物歧化酶(SOD)活力的影响

十、不同藏党参总皂苷给药浓度对睾丸间质细胞的谷胱甘肽(GSH)含量的影响

十一、藏党参和潞党参比较

第五章 讨论

一、藏党参总皂苷提取工艺

二、藏党参总皂苷和总黄酮含量的测定及与潞党参的比较

三、总皂苷和总黄酮量存在差异的原因分析

四、总皂苷的活性

五、大鼠睾丸间质细胞的体外培养

六、藏党参总皂苷对睾丸间质细胞睾酮分泌量的影响及其可能机制

七、藏党参总皂苷对睾丸间质细胞增殖的影响

八、藏党参总皂苷对睾丸间质细胞的影响

第六章 结论

参考文献

附图

攻读学位期间发表的学术论文目录

致谢