HBV野生株和核壳蛋白变异株在HepG2细胞的HLA-I表达及调节机制

摘要

对乙型肝炎病毒(HBV)野生株及核壳蛋白变异株L97和V60在HepG<,2>细胞HLA-I表面表达的特性及其调节机制进行初步探讨,试图认识病毒及其变异与宿主细胞相互作用和影响.构建HBV基因组野生株和核壳蛋白变异株稳定表达载体,提供实验研究的基础材料.通过定点突变技术将1.2拷贝HBV(adr亚型)野生株质粒p3.8Ⅱ构建成核壳蛋白变异株L97和V60质粒,经序列测定证实nt2189A→C和nt2078C→G.3株质粒转染HepG<,2>细胞DNA的Southern blot杂交均显示明显的3.8kb杂交带,培养上清均测定出HBV抗原,表明具有生物活性,分别亚克隆入EB病毒表达载体EBO-plpp使能稳定表达.重组载体EBO-WT、EBO-L97和EBO-V60作限制性内切酶酶切鉴定及再次测序确定点突变.测定HBV野生株和变异株L97、V60诱导HepG<,2>细胞膜HLA-I/抗原肽复合物表达的强度,探讨各株在宿主细胞HLA-I表面表达的特性及核壳蛋白热点变异对HLA-I表达的影响.测定3株HBV转染HepG<,2>细胞内的HLA-I重链基因及抗原提呈相关基因(LMP<,2>、TAP<,1>、Tapasin)的表达,并分析宿主细胞内细胞因子的诱导作用,初步探讨HBV上调HepG<,2>细胞HLA-I表面表达的机制.

目录

前言

第一部分HBV基因组野生株和核壳蛋白变异株载体的构建及鉴定

材料与方法

结果

讨论

第二部分HBV野生株及核壳蛋白变异株对HepG2转染细胞HLA-I表面表达的影响

材料与方法

结果

讨论

第三部分HBV上调HepG2细胞HLA-I表面表达的机制

材料和方法

结果

讨论

全文总结

参考文献

博士学习期间发表与本课题相关的论文与致谢