传染性法氏囊病病毒VP2、VP3蛋白抗原表位分析与定位研究

摘要

本研究利用传染性法氏囊病病毒VP3蛋白的四株单克隆抗体 (VP3-3F,VP3-7B,VP3-7C和VP3-10E)对噬菌体随机15肽库进行了3轮筛选,得到了8个模拟表位,在竞争抑制ELISA中模拟表位与单抗的反应可被VP3蛋白竞争抑制. 为了更进一步详细研究IBDV VP3表位结构,本研究设计表达了一组总数为17个部分重叠且覆盖VP3全长的短肽融合蛋白,利用肽扫描技术对这四株IBDV VP3的单克隆抗体针对的抗原表位进行了研究,鉴定出了两个新的VP3线性表位:109-119aa(多聚蛋白的864-874aa)(针对VP3-3F和VP3-7B),177-190aa(多聚蛋白的932-945aa)(针对VP3-7C和VP3-10E).同源性分析结果显示,这两个表位在多种血清Ⅰ型(除变异株 Variant E)和血清Ⅱ型毒株中同源性为100﹪,是IBDV保守的群特异性表位.这两个表位具有良好的免疫原性和反应原性,说明这两个表位可以作为制备多表位疫苗和诊断试剂的候选肽段. 利用肽扫描技术对三株IBDV VP2的单克隆抗体的抗原表位进行了定位,在VP2高变区侧翼鉴定出了一个新的线性抗原表位:187-199aa.同源性分析结果显示,该表位仅在血清Ⅱ型OH毒株中有变异(1187A、M193L、V194M),说明这个表位是保守的型特异性抗原表位. 该研究将有助于进一步阐明VP2、VP3蛋白抗原结构,探讨其表位生物学功能,对设计科学合理的疫苗和诊断试剂具有重要的意义.

目录

文摘

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第一章绪论

1.1传染性法氏囊病的研究概况

1.1.1病原学

1.1.2流行病学

1.1.3临床症状

1.1.4病理变化

1.1.5 IBDV基因组结构及编码蛋白功能

1.2抗原表位的研究方法及IBDV抗原表位研究进展

1.2.1抗原表位的研究方法

1.2.2抗原表位的研究意义

1.2.3 IBDV抗原表位研究进展

1.3 IBD诊断方法的研究进展

1.3.1 IBD诊断方法的研究

1.3.2基于表位的诊断方法研究

1.4 IBD疫苗的研究进展

1.4.1 IBD疫苗的研究

1.4.2表位疫苗的研究

1.5本研究目的与意义

第二章利用噬菌体展示随机15肽库鉴定IBDV VP3抗原表位

2.1材料与方法

2.1.1材料

2.1.2单抗与随机肽库

2.1.3肽库的生物淘洗

2.1.4噬菌体效价测定

2.1.5噬菌体扩增

2.1.6噬菌体的制备

2.1.7噬菌体短肽的间接ELISA检测

2.1.8竞争抑制ELISA检测

2.1.9噬菌体短肽测序分析

2.2结果

2.2.1肽库的生物淘洗的产率

2.2.2噬菌体短肽的ELISA检测

2.2.3竞争抑制ELISA检测

2.2.4噬菌体短肽测序

2.2.5表位序列分析

2.3讨论

第三章利用Pepscan技术鉴定IBDV VP3抗原表位

3.1材料与方法

3.1.1材料

3.1.2 VP3表位预测及短肽设计

3.1.3 VP3分段扩增、克隆与表达

3.1.4 Pepscan技术筛选抗原表位

3.1.5 ELISA鉴定抗原表位

3.1.6表位免疫原性检测

3.1.7表位反应原性检测

3.1.8表位的同源性分析

3.1.9表位作图

3.2结果

3.2.1 VP3表位预测及短肽设计结果

3.2.2 VP3分段扩增、克隆与表达

3.2.3 Pepscan技术筛选抗原表位

3.2.4 ELISA鉴定抗原表位

3.2.5表位的免疫原性检测结果

3.2.6表位的反应原性检测结果

3.2.7表位的同源性分析

3.2.8表位作图

3.3讨论

第四章利用Pepscan技术鉴定IBDV VP2抗原表位

4.1材料与方法

4.1.1材料

4.1.2 VP2短肽设计

4.1.3 VP2分段扩增、克隆与表达

4.1.4 Pepscan技术筛选抗原表位

4.1.5 ELISA鉴定抗原表位

4.1.6表位的同源性分析

4.1.7表位作图

4.2结果

4.2.1 VP2短肽设计

4.2.2 VP2分段表达

4.2.3 Pepscan技术筛选抗原表位

4.2.4 ELISA鉴定抗原表位

4.2.5表位的同源性分析

4.2.6表位作图

4.3讨论

第五章结论

参考文献

致谢

作者简历