钩状木霉对根结线虫的生物防治作用研究

摘要

根结线虫(Meloidogyne spp.)的寄主范围广、危害重，每年对农作物造成巨大的经济损失，而对根结线虫病的防治措施之一是利用有益微生物进行生物防治。木霉可通过多种机制防治根部病害、促进植株生长和发育及诱导植物产生抗性，因此常被作为植物共生体。为了研究钩状木霉菌株T21（Trichoderma hamatum T21）的内生性，开发了该菌的PEG介导的原生质体遗传转化体系。对T21进行GFP标记，筛选出能稳定遗传的转化菌株GFP_T21。GFP_T21的生长势、生防南方根结线虫效果与T21野生型相比均无显著性差异。因此，GFP_T21为研究钩状木霉的生防作用机理提供了重要材料。
　　钩状木霉防治根结线虫的作用机理研究显示:T21对根结线虫卵无寄生作用，发酵液对南方根结线虫无致死作用。T21生防番茄根结线虫诱导抗性的分根试验结果表明:CK处理番茄每株根结数平均为60.0个，T21处理每株番茄的根结数为16.1个，T21处理和CK处理之间存在极显著性差异(P＜0.0001，α=0.01)。初步说明钩状木霉菌株T21可通过诱导番茄产生抗性，从而对根结线虫病具有很好的防效。GFP_T21可定殖到拟南芥根部，拟南芥水杨酸缺失突变体sid2-2已鉴定成功，从而为下一步挖掘T21杀根结线虫的物质奠定基础。
　　为了探究钩状木霉菌株T21对根结线虫病的应用潜力，以有机肥(JJF)、噻唑膦分别为肥料及化学药剂对照，以不施肥为空白对照，进行盆栽接种根结线虫、根结线虫病温室小区试验及无根结线虫病田间测产试验，通过对黄瓜产量、株高、地上部鲜重以及黄瓜根结线虫病病情指数的调查分析，结果表明:在盆栽试验和温室小区试验中，噻唑膦处理的防治效果分别为89.2％和61.3％，极显著地高于T21菌肥和JJF处理;而T21菌肥处理的防治效果分别为37.5％和31.0％，极显著地高于JJF处理。在盆栽试验、温室小区试验及田间测产试验中，T21菌肥处理的增产幅度分别为22.3％、24.5％和54.5％。因此，钩状木霉菌株T21在防治根结线虫病方面具有极大的推广价值。
　　论文研究证实了钩状木霉菌株T21可通过诱导寄主植物产生抗性，以达到防治根结线虫病的目的，为将来研究T21防治根结线虫机理打下基础。

目录

声明

摘要

英文缩略表

1．1 木霉菌简介

1．2 木霉对根结线虫的生防作用

1．2．1 根结线虫的危害

1．2．2 木霉生防根结线虫的研究进展

1．3 木霉对其他病害的生防作用

1．4 木霉生防作用的机制

1．4．1 木霉菌的多样性

1．4．2 木霉菌的抗生及重寄生作用

1．4．3 木霉菌在植物根际的定殖

1．4．4 木霉的促生作用

1．4．5 木霉诱导植物产生抗-性

1．5 本研究的背景、目的意义、主要内容和技术路线

1．5．1 本研究的背景和目的意义

1．5．2 本研究的主要内容

1．5．3 技术路线

第二章 钩状木霉菌绿色荧光蛋白标记体系建立

2．1 材料与方法

2．1．1 材料

2．1．2 潮霉素B抑菌浓度筛选

2．1．3 T21原生质体制备方法

2．1．4 T21原生质体转化

2．1．5 T21转化子的筛选

2．1．7 GFP_T21的生长速度测定

2．2．2 GFP_T21的荧光检测

2．2．4 GFP_T21的生长速度测定

2．2．5 GFP_T21的盆栽试验

2．3 结论与讨论

第三章 钩状木霉防治根结线虫的作用机理

3．1 材料与方法

3．1．1 材料

3．1．2 T21对线虫卯的寄生

3．1．3 T21发酵液对南方根结线虫的作用

3．1．6 拟南芥突变体sid2-2的鉴定

3．2 结果与分析

3．2．1 T21对线虫卯的寄生

3．2．2 T21发酵液对南方根结线虫的作用

3．2．3 GFP_T21在拟南芥和黄瓜根部的定殖

3．2．4 钩状木霉菌株T21生防番茄根结线虫病的分根试验

3．2．5 拟南芥突变体sid2-2的鉴定

3．3 结论与讨论

第四章 T21生物菌肥对黄瓜生长及根结线虫病的影响

4．1 材料与方法

4．1．1 材料

4．1．2 盆栽试验

4．1．3 温室小区试验

4．1．4 田间测产试验

4．1．5 数据分析

4．2 结果与分析

4．2．1 T21生物菌肥对黄瓜根结线虫病的防治效果

4．2．2 T21生物菌肥对黄瓜长势及产量的影响

4．3 结论与讨论

第五章 全文结论

附录

参考文献

致谢

作者简历