猪瘟病毒疫苗株结构蛋白抗体消长规律研究

摘要

猪瘟(Classical Swine Fever，CSF)是由猪瘟病毒(Classical Swine Fever Virus，CSFV)引起的一种猪的高度接触性传染病。猪瘟分布广泛，死亡率高，是一种严重危害养猪业发展的重要传染性疫病。目前，我国猪瘟防控工作主要还是采取猪瘟兔化弱毒疫苗预防接种的方式进行，定期对免疫后畜群进行血清抗体检测可以评估疫苗免疫效果，改进和优化疫苗免疫程序，有效地预防和控制猪瘟。
　　本研究在Ecoli中表达了CSFV的结构蛋白E0和C，以纯化和鉴定后具有免疫反应性的蛋白作为包被用抗原，分别建立了CSFV血清抗体间接ELISA检测方法，为CSFV抗体监测提供了新的选择。研发的CSFV阻断ELISA抗体检测试剂盒经试验证明，其敏感性、特异性和稳定性良好，可以应用于临床疫苗免疫后抗体水平监测和流行病学调查的工作中。
　　用猪瘟疫苗免疫猪，在免疫后0，7，14，21，28，35，50天收集血清样品，应用重组E2蛋白作为抗原建立的阻断ELISA方法检测E2蛋白抗体消长;分别使用重组E0和C蛋白作为抗原建立的间接ELISA方法，检测免疫过程中抗两种抗原的血清抗体变化特征。抗体检测结果显示:疫苗免疫后第7天即可在血清中检测到抗结构蛋白E2、E0和C的相应抗体，其中针对E2和E0抗原的抗体在免疫后第21天时达到最高水平，E2抗体水平总体呈现先上升后下降的变化趋势;抗E0抗原的抗体在免疫后21天之后有所下降并最终趋于稳定状态;C蛋白抗体在第7天时出现，随后开始下降，在第28天转为阴性。应用建立的ELISA血清抗体检测方法分析疫苗免疫后针对3种结构蛋白的抗体变化特点，可为兽医临床CSF疫苗免疫程序的制定提供有意义的数据参考。

目录

声明

摘要

英文缩略表

第一章 引言

1．1 猪瘟概述

1．1．1 猪瘟病毒概述

1．1．2 猪瘟病毒结构蛋白与功能

1．2 猪瘟诊断方法研究进展

1．2．1 病原学诊断方法

1．2．2 血清学诊断方法

1．2．3 分子生物学诊断方法

1．3 研究目的和意义

第二章 猪瘟病毒阻断ELISA抗体检测试剂盒的评价及E2抗体消长规律研究

2．1 材料和方法

2．1．1 材料

2．1．2 方法

2．2 结果与分析

2．2．1 猪瘟病毒阻断ELISA抗体检测试剂盒的稳定性研究

2．2．2 猪瘟病毒阻断ELISA抗体检测试剂盒的特异性

2．2．3 猪瘟病毒阻断ELISA抗体检测试剂盒检测田间血清以及与同类商品化试剂盒的比较

2．2．4 IFA试验结果

2．2．5 RT-PCR方法检测外周血淋巴细胞中CSFV E2结果

2．2．6 疫苗免疫后CSFV E2抗体消长研究结果

2．3 讨论

第三章 猪瘟病毒E0抗体间接ELISA方法的建立及E0抗体消长规律研究

3．1 材料和方法

3．1．1 材料

3．1．2 方法

3．2 结果与分析

3．2．2 CSFV E0抗体间接ELISA检测方法工作条件的确定

3．2．3 CSFV E0抗体间接ELISA检测方法的评价

3．2．4 E0-ELISA方法检测疫苗免疫后CSFV E0抗体消长

3．3 讨论

第四章 猪瘟病毒C抗体间接ELISA方法的建立及C抗体消长规律研究

4．1 材料和方法

4．1．1 材料

4．1．2 方法

4．2 结果与分析

4．2．2 CSFV C抗体间接ELISA检测方法工作条件的确定

4．2．3 CSFV C抗体间接ELISA检测方法的评价

4．2．4 C-ELISA方法检测疫苗免疫后血清中C抗体消长

4．3 讨论

第五章 全文结论

参考文献

致谢

作者简历