环形泰勒虫转化对B细胞细胞因子的产生及DC细胞抗原吞噬递呈能力的影响

摘要

环形泰勒虫是一种能够转化单核细胞/巨噬细胞、树突状细胞和B细胞的胞内寄生原虫。转化后的细胞能够无限制的增殖，其功能也因环形泰勒虫感染而改变。本研究将对环形泰勒虫转化细胞后，细胞表型及其功能变化开展研究工作，包括细胞表面标志分子、细胞因子、吞噬功能及抗原递呈效率等。在研究过程中，表面标志分子及细胞吞噬抗原的分析通过细胞流式技术实现;通过RT-PCR检测技术，对相关基因（包括细胞因子、吞噬相关蛋白和GTPase RAB家族蛋白）的转录水平进行检测分析。 通过本研究，成功建立了环形泰勒虫转化的B淋巴细胞系。对转化后细胞的细胞因子(IL-1α，IL-1β，IL-4，IL-6，IL-8，IL-10，IL-16，TGF-β1，TNF-α，LT-α/TNF-β，IFN-α和IFN-β)的转录水平和表面标志分子的表达水平进行了比对分析。通过流式细胞技术分析比对了正常B细胞和环形泰勒虫转化B细胞表面标志分子CD21、IgM和CD19(WC4)的表达情况。通过分析，～99％的转化B细胞表达CD21，在第10代和20代的细胞中分别有14.2-6.5％和2.46～1.3％的细胞表达IgM和WC4。与正常B细胞相比，转化细胞的CD21分子表达无变化，但IgM和WC4的表达量大幅度下降，对照组中表达IgM和WC4的细胞比例为96.6％和85.9％。环形泰勒虫感染后，细胞因子IL-4和IL12-α的表达量明显上调。但经布帕伐醌杀灭环形泰勒虫后，IL-12β和IFN-β表达量明显上调。经LPS刺激后，与正常细胞相比，转化细胞的IL-1α，IL-1β，IL-8和IL-16的表达量明显下降。 此外，对单核细胞来源的树突状细胞(MoDC)和环形泰勒虫转化后的DC细胞(TaDC)的抗原吞噬机制及刺激T细胞增殖的能力进行了评价。经分析，在对照组中表达CCR7，DEC-205和CD209分子的MoDC比例均超过70％。环形泰勒虫转化，表达胞表面分子DEC-205的细胞数量无明显变化，高于78.5％。但表达CCR7和CD209的TaDC细胞的数量明显下调，其比例低于7％。MoDC的抗原吞噬能力明显高于TaDC细胞。通过间断性震荡能够明显提高转化细胞的抗原吞噬效果，但趋化因子对其吞噬效果无明显作用。细胞培养液过程中加入甘露聚糖可阻断其细胞表面的受体，从而降低细胞的吞噬能力，其中MoDC的吞噬能力降低25.09～44.14％，TaDC的吞噬能力下降7.42～31.06％。吞噬能力的降低和细胞与甘露聚糖共培养的时间呈负相关。本研究还发现，培养液中加入DMSO可加强TaDC对抗原的吞噬能力，提升效率达128.9％。此外，与正常细胞相比，TaDC细胞表面吞噬相关的受体、配基及Rac的表达下调，而Cdc42和HS1的表达量上调。 细胞增殖实验证明，TaDC细胞对CD4+和CD8+T细胞的刺激能力无明显区别;但MoDC细胞对CD4+T细胞的刺激能力明显高于CD8+T细胞。另外发现，TaDC细胞刺激T细胞的能力伴随培养代次的提高而下降。两种细胞对抗原的细胞内处理能力相似，但都不具有抗原递呈的能力。同样，TaDC细胞中Rab家族基因GTPase的转录水平随培养代次的提升而明显下调。 在后续研究中，可对建立的B淋巴细胞系进行更系统的细胞因子及抗体产生检测，为环形泰勒虫疫苗的研制及预防奠定基础。此外，结果显示环形泰勒虫转化的DC细胞系在低代次阶段可刺激T淋巴细胞增殖从而产生针对特异性抗原的细胞免疫反应。因此，在将来的研究中该细胞系可用于体外研究一些特异性抗原引发的免疫反应。