番茄果实成熟过程中三个乙烯受体基因表达的研究

摘要

该研究测定了普通番茄果实和转反义ACS番茄果实盛花后不同时期的乙稀释放、呼吸强度、色素含量、PG酶活、果实硬度等生理指标,结果表明两者在采后生理方面存在显著差异,转反义ACS番茄果实成熟明显推迟,必需用外源乙烯处理才能正常成熟.根据现已报道的乙烯受体基因序列,在同源性差的区域设计特异引物,采用反转录-聚合酶链式反应（RT-PCR）的方法克隆了449bp的LeETR1和592bp的LeETR4乙烯受体基因目的片段,回收并纯化目的片段后,将其克隆于pGEM-Teasy载体,测序结果表明克隆序列与报道序列完全一致,而与番茄中其它乙烯受体基因同源性较低.采用Northern杂交的方法对乙烯受体基因（LeETR1、LeETR4、NR）在普通番茄和乙烯生成缺陷的转反义ACS番茄果实的表达情况进行了较系统的研究.

目录

文摘

英文文摘

缩略词

第一章前言

一、乙烯与果实成熟

1.1.、呼吸代谢与果实成熟

1.2、乙烯与果实成熟生理过程

1.3、与果实成熟有关的主要基因克隆

二、乙烯生物合成与信号转导

2.1、乙烯的生物合成及延缓果实成熟的基因工程

2.2、乙烯信号转导的研究进展

三、研究目的与意义

第二章材料与方法

一、材料与试剂

1.1、植物材料

1.2、质粒、菌株、试剂

1.3、常用试剂配制

1.4、主要仪器设备

二、基本方法

2.3、果实硬度的测定

2.4、番茄果实色素的测定

2.6、乙烯受体基因LeETR1和LeETR4的克隆

2.7、番茄组织总RNA的提取

2.8、Northern杂交

第三章结果与分析

一、转反义ACS和普通番茄果实采后生理特性

1.1、番茄果实乙烯释放量及呼吸强度的变化

1.2、番茄果实的硬度变化

1.3、番茄果实中色素的变化

1.4、番茄果实PG活性的变化

1.5、外源乙烯对转反义ACS番茄果实催熟效果

二、乙烯受体基因片段的克隆与回收

2.1、LeETR1基因片段的克隆

2.2、LeETR4基因片段的克隆

2.3、克隆序列的同源性分析比较

2.4、乙烯受体基因片段的回收

三、乙烯受体基因在普通番茄和转反义ACS番茄果实中的表达

3.1、RNA提取质量的检测

3.2、.LeETR1在番茄果实中的表达

3.3、外源乙烯对转反义ACS番茄果实LeETR1表达的影响

3.4、LeETR4在番茄果实中的表达

3.5、外源乙烯处理对转反义ACS番茄果实LeETR4表达的影响

3.6、转反义ACS番茄果实LeETR1和LeETR4的RT-PCR结果

3.7、NR在番茄果实中的表达

3.8、外源乙烯处理对转反义ACS番茄果实中NR基因表达的影响

3.9、NR在转反义ACS番茄果实晚期的表达

3.10、NR在番茄花和花蕾中的表达

第四章讨论

一、番茄组织中RNA的提取对策

二、PCR引物设计时的注意事项

三、反义RNA技术在研究果实成熟机理中的作用

四、乙烯及其受体基因在番茄果实成熟中的作用

4.1、乙烯与基因表达

4.2、乙烯受体在番茄果实成熟过程中的作用

第五章结论与后续研究

第六章参考文献

附图

致谢