异位表达Ghrelin和Ghrelin短肽衍生物及Ghrelin联合GHRH促生长效力

摘要

为了研究Ghrelin在体内长期的生理效应,该研究构建了包含猪Ghrelin成熟肽cDNA肌原表达载体(pGEM-wt-sGhln、pGEM-wt-hGhln),N-端第三位丝氨酸突变为色氨酸(Ser<'3>-Trp<'3>)猪Ghrelin突变体cDNA肌原表达载体(pGEM-mt-sGhln、pGEM-mt-hGhln)及猪Ghrelin短肽类似物cDNA肌原表达载体(pGEM-tmt-sGhln、pGEM-tmt-hGhl).结果表明,在直接质粒DNA注射方法中,Ghrelin本身的信号肽/导致的效果优于hGHRH的信号肽/导肽;骨骼肌似能对表达出的Ghrelin具有翻译后辛酰化修饰能力;Ghrelin短肽类似物的生物活性效力可能比Ghrelin成熟肽更高.此外,联合注射pGEM-wt-sGhln & pGEM-wt-hGHRH(含hGHRH cDNA)也促进大鼠增重5个多星期,最佳效果也出现在注射后14天,平均增重比对照组高15％(76.71±4.17g vs 66.96±4.57g,p<0.05),这些结果表明在基因药物方法上,Ghrelin与GHRH在此系统中具有协同刺激生长的作用,初步证实了利用肌肉特异载体异位表达Ghrelin、Ghrelin短肽类似物及合并表达Ghrelin与GHRH在促进大鼠生长上是可行的.为了进一步验证载体pGEM-wt-sGhln、pGEM-tmt-sGhln的促生长效力和增强基因导入效率,在进一步的动物实验中,优化了实验设计,利用Q sepharose XL阴离子交换柱对质粒DNA进行了纯化,并采用布比卡因预处理.结果进一步证实了我们以前的推论:注射编码Ghrelin成熟肽的载体,pGEM-wt-sGhln,能够有效促进大鼠生长达30天,表明骨骼肌似乎能够对在肌肉组织表达的Ghrelin具有行使翻译后修饰能力.而注射编码Ghrelin短肽衍生物载体,pGEM-tmt-sGhln ,也能强烈刺激大鼠生长达30天,表明Ghrelin N-端是其生物活性的

目录

文摘

英文文摘

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缩略词表

第一章文献综述

1.1生长激素分泌的调节

1.1.1 生长激素的结构与功能

1.1.2 生长激素分泌的激素控制

1.1.3 生长激素治疗研究现状

1.1.4 临床治疗问题与展望

1.2基因药物

1.2.1 基因转移体系

1.2.2 基因药物作用的靶器官

1.2.3 基因药物的应用

1.2.4 问题与展望

1.3研究问题的提出及拟采取的实验方案

第二章Ghrelin及其变体衍生物肌原表达载体构建

摘要：

2.1前言

2.2材料与方法

2.2.1 猪Ghrelin成熟肽及其变体衍生物cDNA克隆

2.2.2 肌肉特异表达载体的构建

2.3结果与讨论

第三章异位表达Ghrelin或Ghrelin衍生以及Ghrelin联合GHRH促生长效力

摘要：

英文摘要：

3.1前言

3.2材料与方法

3.2.1 肌肉特异表达载体的构建

3.2.2 大鼠肌内注射表达载体

3.2.3大鼠GH RIA

3.2.4RT-PCR分析基因表达

3.2.5统计分析

3.3结果

3.3.1 体内肌原表达载体活性

3.3.2 大鼠GH释放活性

3.3.3 大鼠Ghrelin与Pgem-tmt-sGhln组织表达

3.4讨论

第四章异位表达Ghrelin和其短肽衍生物促进大鼠生长

摘要：

前言

4.1材料与方法

4.2.1肌原表达载体的提取、纯化

4.2.2 动物实验方案

4.2.3 血清GH水平

4.2.4 RT-PCR分析基因表达

4.2.5 统计分析

4.3结果

4.3.1 体内肌原表达载体活性

4.3.2 大鼠GH释放活性

4.3.3 大鼠Ghrelin与pGEM-tmt-sGhln组织表达

4.4讨论

第五章结论

主要参考文献

附录一pGEM-wt-sGhln测序结果

附录二pGEM-wt-hGhln测序结果

附录三pGEM-mt-sGhln测序结果

附录四pGEM-mt-hGhln测序结果

附录五pGEM-tmt-sGhln测序结果

附录六pGEM-tmt-hGhln测序结果

致谢

作者个人简历