香菇菌株多相鉴定鉴别技术研究

摘要

香菇(Lentinula edodes)是中国最早人工驯化栽培的一种著名食用菌,目前中国虽然是香菇生产大国,但中国香菇菌株鉴别技术落后,一直未实行香菇品种登记制度,品种多样性存在争议,品种知识产权得不到真正的保护.拮抗(antagonism)、同工酶(isozyme)、核糖体转录单位内部基因间隔(intergenic spacer,IGS)和随机扩增多态性(random amplified polymorphic DNA,RAPD)是香菇菌株鉴别中经常使用的技术,它们各有优缺点,目前尚没有关于这几种技术在香菇品种鉴别中的综合分析的报道.微生物菌株鉴别研究表明,一种鉴别技术往往很难达到理想的鉴别效果,而几种技术综合使用可以明显提高鉴别力(discriminatory power,D).同时ISSR(inter simple sequence repeats)作为一种新兴的分子标记技术,尚未应用到香菇的菌株鉴别中.该研究的目的是探讨ISSR技术在香菇菌种鉴别中应用的可能性;比较分析拮抗、同工酶、IGS、RAPD和ISSR在香菇菌株鉴别中的应用;分析中国香菇品种的遗传多样性.对中国香菇栽培品种进行调查,收集41个主要栽培菌株和2个野生菌株,分别利用拮抗、同工酶、IGS、RAPD和ISSR进行菌株鉴别和聚类分析,结果表明:过氧化物酶、多酚氧化酶和酯酶三种同工酶中,酯酶(EST)同工酶多态性最好,可以将43个供试菌株分成19个类型,D为0.910;RAPD可以将43个供试菌株分成20个类型,D为0.932;IGS<,1>可以将43个供试菌株分成9个类型,D为0.844;SR<,1>可以将43个供试菌株分成10个类型,D为0.697;IGS<,2>可以将43个供试菌株分成12个类型,D为0.781;ISSR可以将43个供试菌株分成23个类型,D为0.942.因此,这几种技术的分辨力的高低依次是ISSR、RAPD、EST、IGS<,1>、IGS<,2>、SR<,1>.如果将ISSR、RAPD、EST、IGS<,1>、IGS<,2>和SR<,1>六种方法的结果综合分析,可以将43个供试菌株分成29个类型,D为0.967.同样,ISSR、EST和IGS<,2>这三种方法的结果综合分析也能获得相同的效果(将43个供试菌株分成29个类型,D=0.967).因此,从分辨率的角度来说,ISSR、EST和IGS<,2>这三种方法综合使用比较适合香菇的菌株鉴别.从稳定性和重复性的角度来看,IGS<,1>、IGS<,2>和SR<,1>三者的稳定性和重复性最好,其次是ISSR和EST,而RAPD的稳定性和重复性较差.43个菌株仅能分成29种类型,说明中国香菇栽培菌株之间存在一定的同物异名现象.以两个野生菌株作为对照,聚类分析表明,29个类型菌株间有明显的遗传差异,说明中国的香菇栽培菌株遗传多样性很丰富.

目录

文摘

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第一章绪论

1.1引言

1.2香菇分布及系统学分类地位

1.3我国香菇的育种历史及现状

1.4香菇的品种鉴别

1.5形态学鉴定

1.6交配型因子

1.7拮抗

1.8同工酶

1.9分子生物学手段

1.10本研究目的和意义

1.11研究方案

第二章材料和方法

2.1菌株

2.2菌种活化

2.3拮抗试验

2.4同工酶

2.5 DNA提取

2.6RAPD

2.7 IGS

2.8 ISSR

第三章结果与分析

3.1拮抗

3.2酯酶同工酶

3.3过氧化物酶同工酶

4.4多酚氧化酶同工酶

4.5 RAPD

4.6 IGS

4.7 ISSR

4.8综合分析

第四章结论

参考文献

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致谢