鸡BF2和β2m分子特征与二级结构及其复合体鉴定病毒表位的研究

摘要

鸡的主要组织相容性复合体Ⅰ(BF)位于16号染色体，分为主基因座(BF2)和次基因座(BF1)。BF2呈显性表达，可与抗原多肽和轻链(β2m)结合，将抗原多肽递呈给CTL细胞，诱导机体产生细胞性免疫应答。为了阐明我国地方优质品种鸡BF2和β2m的分子结构特征，解析BF2及β 2m蛋白的空间结构、以及重建BF2-β 2m复合体结合病毒抗原多肽系统，本研究采用PCR技术从三黄鸡、乌骨鸡和珍珠鸡群克隆了24个BF2基因和10个β2m基因。用pMAL-p2X/E.coli可溶性表达系分别表达了BF2和β 2m与MBP融合蛋白。通过Amylose树脂亲合层析纯化、FactorXa蛋白酶切、DEAE琼脂糖分子筛过柱，纯化了表达蛋白：MBP-BF2、MBP-β 2m、MBP，采用圆二色谱(CD)测定了各类蛋白的二级结构(2D)；并同源模建了BF2和β 2m蛋白的三级结构(3D)。本研究揭示了三品种鸡BF2和β2m基因的分子特征，获得了具有正常结构的BF2，β 2m以及BF2-linker-β 2m重组蛋白，阐明了其2D，并在体外初步重建了BF2-β 2m复合体结合病毒抗原多肽系统。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：插图和附表清单、缩略词表

论文独创性声明及论文使用授权声明

第一章引言

1国内外研究现状分析

2研究目的与意义

3研究内容与技术路线

4研究目标

第二章三黄、乌骨、珍珠鸡BF2和β2m cDNA分子克隆与品种多态性分析

摘要

1前言

2材料与方法

3结果

3.1三黄鸡BF2*SH的PCR扩增和酶切鉴定

3.2三黄鸡βm基因的PCR扩增的酶切鉴定

3.3乌骨鸡BF2基因的PCR扩增和酶切鉴定

3.4乌骨鸡β2m基因的PCR扩增和酶切鉴定

3.5珠珠鸡BF2基因的PCR扩增和酶切鉴定

3.6珍珠鸡β2m基因的PCR扩增和酶切鉴定

3.7BF2*SH、BF2*SI、BF2*NMcDNA序列分析

3.8三品种鸡与业航鸡BF2的PBD氨基酸置换位点的比较

3.9三品种鸡与来航鸡BF2基因PBD氨基酸变异规律分析

3.10三品种鸡BF2与TCR接解的氨基酸变异规律分析

3.11三品种鸡BF2的聚类分析

3.12三品种鸡与来航鸡BF2的等位基因群划分

3.13三品种鸡BF2等位基因分子进化树

3.14β2m等位基因分析

4讨论

第三章BF2、β2m以及重组BF2-1inker-β2m基因链的可溶性表达与二级结构测定

摘要

1前言

2材料与方法

3结果与分析

3.1BF2成熟肽基因的PCR扩增、克隆及双酶切鉴定

3.2β2m成熟肽基因的PCR扩增、克隆及双酶切鉴定

3.3重组BF2-linker-β2m基因链的PCR扩增\克隆及双酶切鉴定

3.4表达载体的构建及双酶切鉴定

3.5序列测定

3.6融合蛋白的表达

3.7融合蛋白MBF-BF2、MBP-β2m、MBP-BF2-linker-β2mr的Western-Blot鉴定

3.8融合蛋白的表达

3.9融合蛋白的二次纯化及Factor Xa蛋白酶切割

3.10蛋白酶切割后单位蛋白的分离、纯化

3.11融合蛋白的2D结构解析

3.12重组蛋白MBP-BF2-linker-β2m的热稳定性

3.13BF2*SH及HLA-A2成熟蛋白二级结构预测

3.14鸡BF2和β2m的同源模建

4讨论

5小结

第四章重组BF2-1inker-p2m蛋白体外结合禽流感病毒血凝素T细胞表位测定

摘要

1前言

2材料与方法

3结果

4讨论

5小结

第五章结论

第六章文献综述

1主要组织相容性复合体研究进展

2鸟类主要组织相容性复合体研究进展

参考文献

致谢

作者简历