禽呼肠孤病毒半番鸭分离株单克隆抗体的制备

摘要

本文在番鸭胚成纤维细胞上繁殖的两株从雏半番鸭和雏番鸭中分离的呼肠孤病毒进行了北京鸭胚成纤维细胞适应实验，适应后的病毒形态和血清学鉴定结果证实：病毒具有ARV的形态特征，与鸡源呼肠孤病毒存在抗原相关性。通过RT-PCR克隆出两株病毒的S3基因部分序列，长1104bp，与鸭、鹅分离株S3基因同源性在93％-95％之间。　　选择半番鸭分离株制备单抗。北京鸭胚成纤维细胞适应毒经差速离心和蔗糖密度梯度离心法纯化，免疫8周龄小鼠，取脾细胞与SP2/0骨髓瘤细胞融合。用间接ELISA方法筛选，有限稀释法三次克隆后，获得三株稳定分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株1D5、2D8和3C3。经间接ELISA检测1D5株腹水效价为1:105，2G8、3C3株腹水效价达到1:107。单抗亚类鉴定结果表明：1D5株为IgM，另两株为IgGl，三株单抗的轻链均为κ型。免疫印迹实验表明，两株亚型为IgGl腹水均可和约为75KD的蛋白结合。

目录

文摘

英文文摘

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前言

1禽呼肠孤病毒

2研究目的和意义

第一部分禽呼肠孤病毒半番鸭、番鸭分离株的鉴定

1材料

2方法

3结果

4讨论

第二部分禽呼肠孤病毒半番鸭分离株单克隆抗体的制备

1材料

2方法

3结果

4讨论

第三部分结论

参考文献

致 谢

附录Ⅰ

附录Ⅱ

附录Ⅲ