在高羊茅（Festuca arundinacea Schreb.）中利用基因枪法转化OSISAP1基因的研究

摘要

逆境胁迫是对植物生存的一个严重威胁，植物面对逆境胁迫有其自身的应答调节机制。分子生物学的发展以及生物技术的应用，为人们研究植物的抗逆分子机理提供了理论依据和研究方法。目前人们已经发现了许多与逆境胁迫相关的基因，通过基因工程的办法，过量表达这些基因，使转基因植株增强了对逆境的抗性。高羊茅(FestucaarundinaceaSchreb.)是一种倍受青睐的优质草坪草，高羊茅的育种一直是人们研究的热点，本实验旨在借助基因工程技术，转入一个调控基因，使其在高羊茅中过量表达，以期待获得抗逆性增强的转基因高羊茅植株。 实验克隆了粳稻(Oryzasalivasub.)秋光的锌指蛋白OSISAP1基因，构建不同标记的两个植物表达载体，一个载体是pGreen0229-CaMV35S-OSISAP1-DHA，DHA标记便于免疫印迹的检测，另一个载体是pGreen0229-CaMV35S-OSISAP1-GFP,GFP标记可用于检测绿色荧光，经测序和酶切验证，获得正确的植物表达载体。植物材料采用高羊茅品种交战Ⅱ号，实验建立了高羊茅下胚轴诱导胚性愈伤组织及其再生体系。以基因枪法转化高羊茅胚性愈伤组织，除草剂草丁膦(2mg．L-1PPr)筛选转化的愈伤组织，最终获得再生植株156个。经PCR检测，有26个转DHA标记载体的阳性植株，有37个转GFP标记载体的阳性植株，并且叶片涂抹PPT(2mg．L-1PPT)，转基因叶片有明显的除草剂抗性。免疫印迹杂交检测到目的蛋白杂交条带很微弱，激光共聚焦显微镜检测到明显的绿色荧光，绿荧光蛋白的存在说明目的基因已经整合到高羊茅基因组中，并在转基因植株中得到表达。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：缩写词（Abbreviations ）

独创性声明及关于论文使用授权的说明

第一章文献综述

第二章高羊茅组培再生体系的建立

第三章高羊茅基因枪转化OSISAP1基因

本研究结论

参考文献

附录

致谢