犬乳腺肿瘤病例的临床与实验室诊断分析

摘要

犬乳腺肿瘤疾病是兽医临床常见的一种母犬肿瘤疾病。动物发病的病因、肿瘤组织性质、药物和手术治疗方法以及预后等都与人类乳腺肿瘤疾病较为相似。因此，自然发生的犬乳腺肿瘤疾病已成为人类乳腺肿瘤疾病最好的动物模型。本实验收集自然发生病例，采用临床病史调查、血清激素水平测定、病理组织学和免疫组织化学、原代细胞培养技术、染色体分析、抗癌药物筛选、p53基因易突变片段的RT-PCR检测技术等方法进行系统的研究，以期为犬乳腺肿瘤疾病的诊断利治疗提供理论的依据。试验结果如下： 1.试验以兽医临床上常见的自然发生犬乳腺肿瘤病例作为研究对象，首次在我国境内从肿瘤病因学方向对56个病例进行了系统分析，结果显示：犬乳腺肿瘤病例多发于京叭犬、西施犬、德国牧羊犬及杂犬；发病年龄集中在10岁左右；未生育、未绝育、有假孕史及日粮以肉食为主的患犬多发；发生部位上多为单个乳腺发病，主要集中在右列乳脓及左右两对腹股沟乳腺下方；且患犬雌二醇和孕酮水平较高。鉴于对本病的了解，实施外科手术方法将肿瘤组织予以摘除，其中2例实施乳腺根除术，其余病例实施单个乳腺肿瘤摘除术；同时，对外科手术的术式提出改进措施，从而为犬乳腺肿瘤疾病的兽医临床诊断和手术治疗提供借鉴。 2.外科手术摘除肿瘤样本52例，采用病理组织学观察进行分类，结果显示：恶性乳腺肿瘤占73.08％，其中乳腺浸润性导管癌占50％；良性肿瘤26.92％，其中良性混合瘤和腺肌上皮瘤35.71％。采用免疫组织化学方法，使用多种鼠抗人单克隆抗体标记肌上皮细胞成分，鉴别肿瘤良恶性，并对患犬预后进行评价。结果显示：鼠抗人单克隆抗体p63，Calponin，α-SMA，CK(AE1/AE3)，CK(34βE-12)，CD10，Bcl-2，Ki-67，E-cadherin等抗体能够与犬相应组织发生特异性免疫反应，p63是肿瘤组织肌上皮细胞敏感标记物，Bcl-2可作为动物预后指征之一。 3.选取新鲜肿瘤组织，采用组织块直接培养和酶消化法建立了原代犬乳腺肿瘤细胞系。细胞生长动态学观察表明：消化法培养细胞生长符合“S”形生长曲线，倍增时间为64.66h，细胞经多次传代之后形态无显著差异；经冻存前和复苏后细胞活率检测，结果均在90％以上；染色体核型分析显示二倍体占主体，众数2n=74，第38对染色体和X、Y染色体缺失；细胞免疫化学分析及异体动物移植试验，结果显示：细胞p63、Calponin、34βE-12、E-cadherin、VEGF五种抗体阳性反应，并能够使BALB/c小鼠致瘤，致瘤率40％，证实此肿瘤细胞系为腺肌上皮瘤细胞。 4.采用MTT检测和细胞形态学观察法，证实甲基硒酸、亚硒酸钠、长春新碱等对犬乳腺肿瘤细胞生长有抑制作用；随药物浓度增加、与细胞作用时间延长，药物对细胞生长的抑制作用加强，其中10-3mmol/LNa2SeO3作用72h对肿瘤细胞生长的抑制作用最强。 5.采用RT-PCR技术对正常乳腺组织、肿瘤乳腺组织以及乳腺肿瘤细胞中的p53基因易突变4～7片断进行扩增和分析，结果显示：与犬p53原序列同源，与人p53基因同源性达88％。结合病理组织学诊断和临床回访，证实未发生p53基因突变的患犬预后较好的可能(80％)。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：插图和附表清单及英文缩略词

立题分析与试验设计

独创性声明及关于论文使用授权的说明

第一章文献综述

第二章犬乳腺肿瘤病例的临床资料调查分析

第三章犬乳腺肿瘤病例病理组织学与免疫组织化学研究

第四章犬乳腺肿瘤细胞系的建立与生物学特性分析

第五章抗癌药物的筛选与效果测定

第六章p53基因的克隆与分析

第七章结论

创 新

参考文献

致 谢

作者简历