左旋咪唑和共刺激分子作为佐剂用于病毒性乙型肝炎治疗性疫苗的研究

摘要

乙型肝炎是由乙型肝炎病毒(HBV，hepatitis B virus)引起的一种影响人类健康的重要传染病。乙肝疫苗的接种是目前控制乙型肝炎感染的最有效的措施，但是传统的乙型肝炎亚单位疫苗是由乙型肝炎病毒的表面抗原和铝佐剂组成，铝佐剂决定了该疫苗仅能引起很好的体液免疫而不能产生有效的细胞免疫，因此传统的乙型肝炎亚单位疫苗仅激活体液免疫反应，没有能力激活细胞免疫。所以，乙型肝炎亚单位疫苗仅起到预防乙型肝炎病毒的感染，没有治疗作用。 佐剂可以增强细胞免疫，体液免疫，活T细胞，上调细胞因子的表达，增强免疫记忆，并能改变其免疫反应类型。因此对佐剂进行改良可能增强传统乙型肝炎亚单位疫苗细胞疫免有望使之成为治疗性疫苗。左旋咪唑(levamisole，LMS)是一种咪唑类似物，最初广泛的用动物和人驱除体内寄生虫。近年米许多研究报道表明，LMS是一种良好的免疫增强剂它能使受抑制的吞噬细胞和淋巴细胞功能恢复正常，可以作为一种佐剂物质用丁癌症治疗的研究。我们实验室近年来对左旋咪唑的佐剂作用进行了人量的研究，发现左旋咪唑能够增强口蹄疫疫苗灭活疫苗的细胞免疫和体液免疫，并初步探索了作用机理。本研究利用LMS与传统的乙型肝炎亚单位疫苗混合免疫C57BL/6小鼠，检测产生的体液和细胞免疫水平，结果表明在免疫后21天，LMS诱导产生了较高水平的IgG利IgG2a/IgG1的比率；LMS刺激产生了较强的T细胞增值和CTL反应。为进一步探讨LMS作为佐剂增强免疫反应的作用机理，对细胞因子和DC细胞表面分子进行进行检测，结果表明LMS能够上调细胞因子的表达和上调DC表面分子CD11c的表达。同时在以上实验的基础上研究了不同浓度的LMS与乙型肝炎亚单位苗疫分开或混合免疫C57BL/6小鼠，结果表明在免疫后21天，1％LMS分开或混合免疫均能诱导产生了较高水平的IgG和IgG2a/IgG1的比率：1％LMS分开或混合免疫均能刺激产生了较强的T细胞增值和CTL反应，进一步探讨LMS作为佐剂增强免疫反应的作用机理，1％LMS分开或混合免疫都上调CD4<'+>T细胞IL-4，IFN-γ和CD8<'+>T细胞IFN-γ表达。以上研究结果表明1％LMS与乙型肝炎亚单位苗疫分开或混合免疫能够增强其细胞免疫效果。 DNA疫苗能够诱导产生有效免疫反应，尤其是能够产生有效的细胞免疫的优点，在许多疫苗的研究中已经取得很人进步，可以弥补了传统乙型肝炎疫苗的不足。但是DNA疫苗在大动物和人体中的免疫效力尚不理想，因此如果克服DNA疫苗的不足，乙型肝炎DNA疫苗有望成为HBV治疗性疫苗。4-1BBL，OX40L，和CD70是APC细胞进行抗原递呈的第二信号，能够增强T细胞的活化增殖，分化，增强CTL反应，延K T细胞的存活时间和增强免疫记忆。因此在本实验中我们利用4-1BBL，OX40L，和 CD70二种共刺激分子作为分子佐剂与乙型肝炎DNA疫苗一起免疫C57BL*6小鼠，结果表明在免疫后42天，这二种共刺激分子佐剂均能很好的诱导产生了较高水平的IgG利IgG2a/IgG1的比率；产生较强的T细胞增值和CTL反应，同时能够上调CD4<'+>T细胞IL-4，IFN-γ和CD8<'+>T细胞1FN-γ的表达。同时对其能否增强免疫记忆反应也进行研究，其结果表明，这二种共刺激分子均能增加记忆性T细胞的数目，增强免疫记忆反应；并进一步分析增强免疫记忆反应机理，对免疫记忆反应相关的基因表达进行了检测，结果表明这三种共刺激分子作为佐剂均能上调BCL-2，Spi2A，IL-7Ra和IL-15Ra的表达，说明其佐剂功能在免疫记忆方面也有一定的影响。以上研究结果表明4-1BBL，OX40L，和CD70三种共刺激分子作为分子佐剂，能够有效的增强细胞免疫和免疫记忆反应。亚总而言之，本研究证实了LMS是一种良好的免疫增强剂，能够很好的提高传统的乙型肝炎亚单位疫苗佐剂的细胞免疫，同时发现4-1BBL，OX40L，和CD70三种共刺激分子作为分子佐剂与乙型肝炎DNA疫苗一起免疫能够有效的增强细胞免疫和免疫记忆反应，为乙型肝炎治疗性疫苗的研究奠定了基础，为佐剂的机理研究提供了理论依据，同时为佐剂的改良和研发提供了坚实的理论基础。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：图表清单、缩略词表、实验主要仪器

声明

文献综述

第一章乙型肝炎及乙型肝炎病毒

第二章乙型肝炎的防治

第三章免疫佐剂

第二篇研究论文

引言

第一章左旋咪唑作为佐剂增强乙型肝炎亚单位疫苗细胞免疫的研究

1.引言

2.材料与方法

3.结果

4.讨论

5.小结

第二章不同浓度的LMS对乙型肝炎亚单位疫苗免疫效果的影响

1.引言

2.材料与方法

3.结果

4.讨论

5.小结

第三章共刺激分子作为佐剂增乙型肝炎DNA疫苗细胞免疫和免疫记忆反应的研究

1.引言

2.材料与方法

3结果

4.讨论

5.小结

第三篇结论与展望

本研究的创新点

附录

参考文献

致 谢

作者简介