猫传染性腹膜炎病毒RT-PCR检测方法的建立及核衣壳蛋白的表达

摘要

猫传染性腹膜炎属于高感染率低发病率、慢性、渐进性、致死性传染病，以腹膜炎、大量腹水积聚及致死率较高为主要特征，其临床症状不具有明显的特征性，因此对于诊断有一定的难度。 临床上疑似猫传染性腹膜炎的患病猫5只，经组织病理学诊断，确诊为猫传染性腹膜炎。设计一对特异性引物，进行RT-PCR扩增，结果5只猫均为阳性，对临床疑似猫传染性腹膜炎的44例腹水或胸水进行RT-PCR检测，其中有30例为阳性，14例为阴性。 FIPV的N蛋白是结构蛋白，长度为377个氨基酸，处于病毒颗粒的核心，在病毒结构中起重要作用。通过对自然感染病例N基因的测序和比较，分析我国FIPV的N蛋白抗原变化情况。采用RT-PCR方法扩增FIPV的N基因，分别从10份FIPV阳性材料中获得N基因的完整序列，发现获得的氨基酸序列存在变化，429缺失一个氨基酸，408缺失一个氨基酸同时又插入2个氨基酸，其余8株均为377个氨基酸。 设计表达引物，通过RT-PCR进行扩增，成功构建了表达载体。pGEX-N。重组表达蛋白以包涵体的形式存在于大肠杆菌中，融合蛋白N的分子量为68.7KDa，Western-blot分析表明N蛋白与FIPV抗血清产生特异性反应。FIPV N蛋白的表达为其免疫原性和蛋白功能研究奠定了一定的基础。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：缩略语

声明

第一章绪论

1.1病原学

1.2流行病学

1.3诊断

1.4治疗

1.5疫苗及免疫

1.6防制

1.7研究目的和意义

第二章5例猫传染性腹膜炎病例的症状、剖检变化和组织病理学诊断

2.1材料

2.2方法

2.3结果

2.4讨论

第三章猫传染性腹膜炎病毒RT-PCR检测方法的建立及初步应用

3.1材料

3.2方法

3.3结果

3.4讨论

第四章猫传染性腹膜炎病毒N蛋白基因的克隆及抗原表位分析

4.1材料

4.2方法

4.3结果

4.4讨论

第五章猫传染性腹膜炎病毒N蛋白的克隆及表达

5.1材料

5.2方法

5.3结果

5.4讨论

第六章结论

参考文献

附录

致谢