黄柏生物碱及其复方对猪和小鼠热应激中IL-4/IFN-γ的调控机制

摘要

近年来，很多证据表明Th1和Th2细胞在介导机体免疫应答中具有重要作用。Th1/Th2通过分泌的细胞因子进行自我和相互调节，维持二者的免疫平衡，这一特性与中医理论的阴阳学说极为相似。Th1/Th2的平衡作为免疫平衡的核心，对免疫系统的稳定起着重要调节作用。Th1分泌的LFN-γ与Th2分泌的IL-4之间的平衡对Th1/Th2起关键调控作用。在实际研究中，一般以高表达的IFN-γ和IL-4分别代表Th1和Th2。 在兽医临床中发现，由黄柏、苍术、藿香、石膏以不同比例组成的中药复方Ⅰ和中药复方Ⅱ，可提高猪对高热环境的适应能力。为探讨黄柏生物碱及其复方对热应激的调控机制，本文研究了高温应激条件下猪和小鼠免疫相关指标lFN-γ、IL-4的变化规律以及黄柏生物碱及其复方的免疫调节作用。完成的实验有： 采用ELISA法，研究中药复方对热应激后猪血清、脾脏中IFN-γ、IL-4水平的调控作用。热应激可使IFN-γ、IL-4水平显著上升，中药复方Ⅰ和中药复方Ⅱ均可显著调节热应激时IFN-γlL-4水平的升高，使其恢复到正常，且中药复方Ⅱ的效果更好。进一步研究中约复方Ⅱ显示，中药复方Ⅱ可有效调节热应激所致的小鼠脾脏中IFN-γIL-4的改变，使其恢复至正常。 为评价复方中黄柏活性部位的药理作用，建立了小鼠脾脏淋巴细胞体外增殖的热应激模型。热应激模型条件为：热应激温度40℃、热应激时间1h、热应激后3h采样测定。 对黄柏生物碱的提取和纯化进行了优选。采用比色法筛选碱提、醇提、酸提、酸醇提四种黄柏提取方法，醇提法的效果最好；采用正交设计法优化黄柏醇提法的提取工艺，提取工艺为：生药10倍量的75％乙醇回流提取3次，每次1.5h；采用大孔树脂吸附法和盐析法筛选黄柏纯化工艺，前者效果较好且以30％的乙醇作为洗脱剂，所得生物碱的含量最高。 采用MTT法，筛选黄柏生物碱的活性部位，高温可显著抑制小鼠脾脏淋巴细胞的增殖。碱提、醇提、酸醇提、酸提黄柏生物碱(100μg/ML)均可显著促进小鼠脾脏淋巴细胞增殖。用大孔吸附树脂纯化醇提的黄柏生物碱进行药效学筛选，结果显示100μg/mL的黄柏生物碱对小鼠脾脏淋巴细胞体外增殖的促进作用最强。为进一步验证MTT法筛选出的黄柏生物碱活性部位对热应激的免疫调控作用，采用ELISA法测定了体外培养小鼠脾脏淋巴细胞IFN-γ、IL-4的含量，小鼠脾脏淋巴细胞在热应激条件下IFN-γ、IL-4水平偏离正常，纯化黄柏生物碱可使其迅速恢复止常。 以上试验表明，黄柏生物碱及其中药复方均可显著调节热应激对机体免疫机能所致的改变，维持机体在高温下的稳态。

目录

文摘

英文文摘

声明

第一章引言

1文献综述

第二章中药复方对猪热应激时血清中IFN-γ、IL-4水平的影响

1材料与方法

1.1试验动物及试验场所

1.2试验药物

1.3试验基础日粮组成及营养水平

1.4主要仪器

1.5试剂及配制方法

1.6饲养管理

1.7试验方法

1.8主要检测指标及统计方法

2结果

2.1猪临床症状

2.2中药复方对猪热应激时血清中IFN-γ水平的影响

2.3中药复方对猪热应激时血清中IL-4水平的影响

2.4中药复方对猪热应激时血清中IL-4/IFN-γ比值的影响

3讨论

3.1对猪热应激后临床症状的探讨

3.2热应激对猪血清中IFN-γ、IL-4分泌水平及IL-4/IFN-γ比值的影响

3.3中药复方对猪血清中IFN-γ、IL-4分泌水平及IL-4/IFN-γ比值的影响

4小结

第三章中药复方对猪热应激时脾脏中IFN-γ、IL-4水平的影响

1材料与方法

1.1试验动物及试验场所

1.2试验药物

1.3主要仪器

1.4试剂及配制方法

1.5试验方法

1.6主要检测指标及统计方法

2结果

2.1中药复方对猪热应激时脾脏中IFN-γ水平的影响

2.2中药复方对猪热应激时脾脏中IL-4水平的影响

2.3中药复方对猪热应激时脾脏中IL-4/IFN-γ比值的影响

3 讨论

3.1热应激对猪脾脏中IFN-γ、IL-4分泌水平的影响

3.2中药复方对猪脾脏中IFN-γ、IL-4分泌水平的影响

3.3中药复方对热应激时猪脾脏中IL-4/IFN-γ比值的调节作用

4小结

第四章中药复方对小鼠热应激时脾脏IFN-γ、IL-4水平的影响

1材料与方法

1.1试验动物

1.2试验药物

1.3主要仪器

1.4试剂

1.5试验方法

1.6主要检测指标及统计方法

2结果

2.1小鼠临床症状

2.2中药复方对小鼠热应激时脾脏中IFN-γ水平的影响

2.3中药复方对小鼠热应激时脾脏中IL-4水平的影响

2.4中药复方对小鼠热应激时脾脏中IL-4/IFN-γ比值的影响

3讨论

3.1热应激对小鼠脾脏中IFN-γ、IL-4分泌水平影响的探讨

3.2中药复方对小鼠脾脏中IFN-γ、IL-4分泌水平的调节

3.3中药复方对热应激时小鼠脾脏中IL-4/IFN-γ比值的调节作用

4小结

第五章小鼠脾脏淋巴细胞体外增殖热应激模型的建立

1材料与方法

1.1试验动物

1.2主要试剂及配制方法

1.3主要仪器

1.4实验方法

1.5数据处理

2结果

2.1小鼠脾脏淋巴细胞不同培养时间结果

2.2 ConA浓度筛选结果

2.3小鼠脾脏淋巴细胞增殖的热应激模型的正交试验结果

3讨论

3.1小鼠脾脏淋巴细胞体外增殖反应细胞体系的确立

3.2小鼠脾脏淋巴细胞体外增殖热应激模型的建立

4小结

第六章黄柏生物碱提取纯化工艺的研究

1材料与方法

1.1主要仪器和试剂

1.2药材及对照品

1.3试验方法

2结果与分析

2.1黄柏提取方法的优选

2.2黄柏总生物碱的测定

2.3正交试验设计优化黄柏提取工艺

2.4大孔吸附树脂分离法纯化黄柏生物碱

2.5盐析法纯化黄柏生物碱

3讨论

3.1黄柏四种提取方法的比较

3.2黄柏生物碱提取过程中的影响因素

3.3黄柏生物碱的纯化方法

4小结

第七章黄柏生物碱对热应激后小鼠脾脏淋巴细胞体外增殖的影响

1材料与方法

1.1试验动物

1.2药物及配制方法

1.3主要试剂及配制方法

1.4主要仪器

1.5实验方法

1.6数据处理

2结果

2.1黄柏四种提取生物碱及其五种浓度对热应激后小鼠体外脾脏淋巴细胞增殖的影响

2.2大孔吸附树脂纯化黄柏生物碱及其五种浓度对热应激后小鼠体外脾脏淋巴细胞增殖的影响

3.讨论

3.1热应激对小鼠脾脏淋巴细胞体外增殖的影响

3.2黄柏四种方法提取生物碱对热应激后小鼠脾脏淋巴细胞体外增殖的影响

3.3纯化黄柏生物碱对热应激后小鼠脾脏淋巴细胞体外增殖的影响

3.4黄柏生物碱促进小鼠脾脏淋巴细胞增殖的探讨

4小结

第八章纯化黄柏生物碱对热应激后小鼠体外脾脏淋巴细胞分泌IFN-γ、IL-4的影响

1材料与方法

1.1试验动物

1.2药物及配制方法

1.3试剂及其它用品

1.4溶液的配制

1.5主要仪器

1.6试验方法

1.7主要检测指标及统计方法

2结果

2.1纯化黄柏生物碱对热应激后小鼠体外培养的脾脏淋巴细胞分泌IFN-γ、IL-4水平的影响

2.2纯化黄柏生物碱对热应激后小鼠体外培养的脾脏淋巴细胞分泌IL-4水平的影响

2.3纯化黄柏生物碱对热应激后小鼠体外培养的脾脏淋巴细胞IL-4/IFN-γ比值的影响

3讨论

3.1纯化黄柏生物碱对热应激后小鼠体外培养的脾脏淋巴细胞分泌IFN-γ、IL-4水平的探讨

3.2纯化黄柏生物碱对热应激后小鼠体外培养的脾脏淋巴细胞IL-4/IFN-γ比值的探讨

4小结

结论

创新点

参考文献

致谢

个人简介