骨碎补水提液和柚皮苷对体外培养的大鼠成骨细胞的影响

摘要

为了探讨骨碎补及其主要有效成分柚皮苷对机体骨骼代谢的影响，本研究采取二次酶消化法，以新生24 h大鼠的颅骨为材料分离培养成骨细胞，经形态观察(瑞氏染色)、ALP染色和钙化结节(茜素红、Von Kossa)染色鉴定后，进行传代培养。以细胞培养液中不加药物的试验组作为空白对照，采用MTT法、PNPP法及酶联免疫吸附测定法(ELISA)分别检测不同浓度的骨碎补水提液(10mg/mL、1 mg/mL、1.0×10<'-1>mg/mL、1.0×10<'-2>mg/mL、1.0×10<'-3>mg/mL、1.0×10<'-4>mg/mL、1.0×10<'-5>mg/mL)及柚皮苷(1.0×10<'-4>mol/L、1.0×10<'-5>mol/L、1.0×10<'-6>mol/L、1.0×10<'-7>mol/L)对体外培养的大鼠第三代成骨细胞增殖、分化功能及细胞分泌IGF-I水平的影响。结果表明： 1．骨碎补水提液及柚皮苷分别作用于体外培养的大鼠成骨细胞48 h和72 h后，二者能明显促进成骨细胞的增殖。作用48 h，较高浓度的骨碎补水提液组和柚皮苷组对成骨细胞有较强的促增殖作用；作用72 h，骨碎补水提液和柚皮苷各浓度组均能显著促进成骨细胞增殖，其作用比48 h佳。 2．骨碎补水提液和柚皮苷作用于体外培养的大鼠成骨细胞48 h后，与对照组相比，中浓度(1.0×10<'-3>mg/mL、1.0×10<'-2>mg/mL)的骨碎补水提液能够使成骨细胞ALP活性显著升高(P<0.05)，从而促进成骨细胞的分化，但各柚皮苷试验组无此作用。 3．骨碎补水提液及柚皮苷作用于体外培养的大鼠成骨细胞72 h后，各试验组均使细胞分泌IGF-I的水平降低。其中，1.0×10<'-7>mol/L、1.0×10<'-4>mol/L柚皮苷试验组和10 mg/mL骨碎补试验组与对照组相比，差异显著(P<0.05)；1.0×10<'-3>mol/L柚皮苷试验组与对照组相比，差异极显著(P<0.01)。

目录

文摘

英文文摘

论文说明：英文缩略词对照表

声明

第一章引言

1研究目的和意义

2文献综述

2.1成骨细胞简介

2.2成骨细胞体外培养的研究进展

2.3中药对成骨细胞作用的研究现状

第二章大鼠成骨细胞的体外培养及鉴定

1材料

1.1试验动物

1.2主要仪器与耗材

1.3主要试剂

1.4主要溶液的配制

2方法

2.1原代细胞分离、培养

2.2细胞传代

2.3成骨细胞的鉴定

2.4细胞冻存及复苏

3结果

3.1成骨细胞的原代培养

3.2成骨细胞的传代

3.3成骨细胞的鉴定

3.4细胞的冻存和复苏

4讨论

4.1成骨细胞的原代分离培养

4.2细胞的传代

4.3细胞的鉴定

4.4培养体系的污染

第三章骨碎补水提液及柚皮苷对大鼠成骨细胞的影响

1材料

1.1试验动物

1.2主要仪器与耗材

1.3药品及主要试剂

1.4溶液的配制

2方法

2.1大鼠成骨细胞的培养

2.2药物培养液的制备与分组

2.3 MTT法检测成骨细胞的增殖

2.4 PNPP法检测成骨细胞的碱性磷酸酶(ALP)活性

2.5胰岛素样生长因子Ⅰ(IGF-Ⅰ)的检测

2.6统计学处理

3结果

3.1不同浓度柚皮苷对大鼠成骨细胞增殖的影响

3.2不同浓度骨碎补水提液对大鼠成骨细胞增殖的影响

3.3不同浓度柚皮苷对大鼠成骨细胞ALP活性的影响

3.4不同浓度骨碎补水提液对大鼠成骨细胞ALP活性的影响

3.5不同浓度柚皮苷对大鼠成骨细胞分泌IGF-Ⅰ的影响

3.6不同浓度骨碎补水提液对大鼠成骨细胞分泌IGF-Ⅰ的影响

4讨论

4.1骨碎补水提液及柚皮苷对大鼠成骨细胞增殖的影响

4.2骨碎补水提液及柚皮苷对大鼠成骨细胞分化的影响

4.3骨碎补水提液及柚皮苷对大鼠成骨细胞分泌IGF-Ⅰ的影响

第四章结论

参考文献

致谢

附图

作者简历