中药通络搽剂治疗软组织损伤的主要药效学研究

摘要

目的：通过建立动物损伤模型，采用甘肃省中医院院内制剂-中药通络搽剂作为治疗药物，从分子生物学、组织形态学、病理学角度研究中药通络搽剂对大鼠闭合性软组织损伤的修复作用，为该药临床治疗急性闭合性软组织损伤提供理论依据。本研究将得到一种具有药物不良反应小、提高机体局部疼痛阈值、迅速修复受损软组织的特点的创新药物，为中药现代化的发展提供新的佐证。
　　方法：本实验取50只健康、成年清洁级大鼠，月龄2月，体重180~220g，雌雄各半。造模方法参照邱桐等[1-3]动物闭合性软组织损伤的实验方法并且略加修改。随机分为3组：通络搽剂组、阳性药物对照组、模型对照组，造模成功后1小时开始给药，模型对照组不使用任何药物。每日两个相同时相点重复，用医用橡胶手套切取宽约1cm的条带绑扎患肢，以免大鼠舔舐实验用药，造模后按第一天、第三天、第五天三个时相，每组随机取5只大鼠采集血液和损伤软组织置入4％多聚甲醛溶液固定。本次实验主要通过以下几个方面来观察治疗软组织损伤疾病的药理作用。1)血液使用ELISA法检测炎症因子白介素、前列腺素含量变化；2）软组织使用HE染色和免疫组化检测三组大鼠软组织病理改变和新生血管内皮标志物JG12和Ki67的出现及分布情况；3）肉眼观察并评定其损伤结果变化。
　　结果：1）大鼠经造模后通络搽剂组、正骨水组、模型对照组三组血液中炎症因子白介素IL-1和前列腺素PGE2浓度变化经用ELISA法检测情况：模型组与通络搽剂组比较在第5天时相点差异性显著(P＜0.05)，说明中药通络搽剂治疗闭合性软组织损伤在该指标上效果显著；通络搽剂组与正骨水组比较集中在第一、三次测量时相时无统计学意义(P＞0.05)，说明二者治疗闭合性软组织损伤在该指标方面无明显差异性。模型对照组血清中PGE2和IL-1含量明显高于通络搽剂组和正骨水组；通络搽剂组在损伤第1天、第3天、第5天均能明显抑制损伤软组织中PGE2和IL-1的升高，且与正骨水组比较，无显著性差异；但通络搽剂组和正骨水组跟模型对照组有显著性差异。2）大鼠经造模后通络搽剂组、正骨水组、模型对照组三组损伤软组织标本中用药后的组织切片 HE染色情况显示：在本实验的造模情况下经过中药通络搽剂5天治疗后局部损伤软组织基本接近于正常组织。3）大鼠经造模后通络搽剂组、正骨水组、模型对照组三组损伤软组织标本中用药后的组织切片以SABC法免疫组化染色进一步观察微血管的增生，①在通络搽剂组中有表达，在正骨水组和模型对照组中接近于无表达；4）肉眼观察结果损伤征候指数观察见通络搽剂组和正骨水组均能促进损伤局部肿胀、皮下瘀斑和皮下出血的消散，与模型对照组有明显的差异。
　　结论：中药通络搽剂确实对软组织损伤实验大鼠有明显的治疗作用。可能与其调节局部及全身血液炎症因子，影响PGE2、IL-1β表达机制、加快组织修复有关，另外在血管内皮细胞分化等方面也有明显地促进作用。

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符 号 说 明

前 言

第一部分 立题依据

1 综述

1.1 疗效

1.2作用机理

1.3模型种类

1.4 剂型种类

2 目前中医药治疗中发现的问题

3 目前西医理论方向

4 炎症因子PGE2和IL-1β文献简述

4.1 PGE2文献简述:

4.2 IL-1β文献简述：

5 血管内皮标记物与JG12和Ki67:

5.1 血管内皮标记物:

5.2 JG12：

5.3 Ki67：

第二部分 实验研究

1 材料与方法

1.1 实验动物

1.2 实验药物

1.3 实验试剂：

1.4 实验器械：

1.5 动物饲养:

1.6 动物造模及处理

1.7 前列腺素PGE2检测：

1.8 白介素IL-1β检测：

1.9 组织HE染色步骤：

1.10 组织免疫组化染色步骤：

1.11 观察指标和检测指标

1.12 统计学处理:

2 结果

2.1 标准曲线图：

2.2 统计学数据：

2.3 组织病理学检查结果:

2.4 分子生物学免疫组化检测结果：

3 分析与讨论：

3.1 祖国医学对软组织损伤的认识

3.2 软组织损伤动物模型的建立及评价

3.3 中药通络搽剂组方功效特点

3.4 通络搽剂对大鼠炎症因子的影响

3.5 通络搽剂对大鼠软组织微血管内皮标记物的影响

3.6 通络搽剂阳性对照药的选择

3.7 关于实验的偏倚不足及优点

3.8 本实验的难点和创新点

4 结 语

参考文献

附录一

附录二

附录三

附录四

附录五

致谢