特发性肺纤维化大鼠不同时期微血管变化特征及黄芪甲苷的干预研究

摘要

目的：通过观察黄芪甲苷对特发性肺纤维化（IPF）模型大鼠不同时期一般状态、病理组织学变化，及碱性成纤维细胞生长因子（BFGF）和微血管密度（MVD）在肺组织中的表达，初步探讨黄芪甲苷对IPF的防治作用及对微血管新生的影响机制。
　　方法：将130只SPF级Wistar大鼠随机分为空白组、模型组、激素组、黄芪甲苷高剂量组、黄芪甲苷中剂量组、黄芪甲苷低剂量组，共六组，每组21只。采用气管推注博莱霉素（BLM）诱导IPF大鼠模型。造模次日开始灌胃，连续灌胃治疗28天，分别在7天、14天、28天分批处死大鼠，采集标本。观察大鼠一般状态，分别以 HE、Masson染色镜下观察大鼠肺组织病理组织学变化，利用免疫组化SABC法及结合图像分析技术，检测大鼠肺组织BFGF和MVD在7天、14天、28天的表达。
　　结果：
　　1.大鼠一般状态观察空白组大鼠精神、饮食良好，皮毛光泽，体重逐渐增加，呼吸平稳。模型组大鼠饮食欠佳，精神萎靡，皮毛稀疏，无光泽，活动较少，呼吸急促，体重减轻。激素组早期尚可，后期饮食逐渐减少，皮毛稀疏，好静。黄芪甲苷高、中剂量组早期精神不佳，皮毛无光泽，呼吸欠平稳，中后期精神尚可，饮食及活动良好，皮毛较光泽，呼吸平稳，体重逐渐增加。黄芪甲苷低剂量组精神、饮食尚可，行动迟缓，体重增加不明显。
　　2.大鼠肺组织肉眼观察空白组大鼠肺组织无明显变化。模型组大鼠肺组织明显充血、水肿，颜色暗红，表面粗糙，大片瘀点、瘀斑，表面凹凸不平的苍白灶，病变程度明显重于其他各组。与模型组相比，黄芪甲苷高、中、低剂量组和激素组病变程度减轻。与激素组相比，黄芪甲苷高、中低剂量组病变程度明显减轻。黄芪甲苷低剂量组和激素组接近，较模型组轻。
　　3. HE、Masson观察结果空白组肺组织正常。模型组：7d肺组织肺泡间隔明显增宽，有各类炎性细胞侵润，肺组织结构萎缩、塌陷，肺泡腔有炎性渗出物；14d肺泡炎减轻，成纤维细胞增生，逐渐出现肺纤维化；28d纤维化区域病变最为最严重。与同期模型组相比，7d、14d、28d黄芪甲苷高、中、低剂量组和激素组肺泡炎和肺纤维程度明显减轻。与激素组相比，7d、14d、28d黄芪甲苷高、中剂量组肺泡和肺纤维化程度减轻。7d、14d、28d黄芪甲苷低剂量组肺泡炎及肺纤维化程度与同期激素组接近。
　　4.微血管密度（MVD）表达结果与空白组比较，模型组肺组织MVD在7d、14、28d表达的显著升高，差异有显著性意义。与模型组比较，黄芪甲苷高、中、低剂量组、激素组肺组织MVD在7d、14d、28d表达降低，差异有统计学意义。与激素组比较，黄芪甲苷高、中剂量组肺组织MVD在7d、14d、28d明显减低，差异有统计学意义。与激素组相比，黄芪甲苷低剂量组肺组织MVD在7d、14d、28d表达无统计学意义。
　　5.碱性成纤维细胞生长因子（BFGF）表达结果与空白组相比，模型组大鼠肺组织BFGF表达在7d、14d、28d的表达明显增强，差异有显著性意义。与模型组相比，黄芪甲苷高、中、低剂量组和激素组BFGF的表达在7d、14d、28d的表达减低，差异有统计学意义。与激素组比较，黄芪甲苷高、中剂量组BFGF7d、14d、28d明显降低，差异有统计学意义。黄芪甲苷低剂量组BFGF表达在7d、14d、28d与同期激素组比较，差异无统计学意义。
　　结论：
　　1.本实验采用气管推注博莱霉素成功建立具有IPF大鼠模型。
　　2.博莱霉素诱发大鼠肺纤维化发病过程中，大鼠肺组织病理组织学变化7天、14天以肺泡炎为主，28天肺泡炎减轻，肺纤维化加重。
　　3.博莱霉素诱发大鼠肺纤维化发病过程中存在病理性微血管新生，以14天尤为活跃，随肺纤维化的加重，微血管新生数目逐渐减少。
　　4.博莱霉素诱发大鼠肺纤维化发病过程中，BFGF是重要促血管新生因子之一，给予黄芪甲苷干预后，BFGF表达降低。
　　5.黄芪甲苷高、中剂量组可以减轻肺泡炎和肺纤维化，从而抑制微血管新生，达到防治IPF的目的。其作用与药物剂量有关。

目录

封面

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中文摘要

英文摘要

英文缩略词表

前言

一 立题依据

二 实验研究

1技术路线图

2 材料与方法

3 实验方法

4 数据的统计与处理

5 实验结果

三 讨 论

1黄芪甲苷与IPF

2 IPF大鼠造模和模型的评价

3对大鼠一般状态的影响

4黄芪甲苷对IPF模型大鼠肺组织病理形态学的影响

5 黄芪甲苷对IPF模型大鼠肺组织微血管密度（MVD）的影响

6黄芪甲苷对IPF模型大鼠肺组织（BFGF）的影响

四 结 语

1结论

2不足与展望

参考文献

附录

附录1 HE染色标记图片

附录2 Masson染色标记图片

附录3 特发性肺纤维化病变发展图片

附录4 BFGF免疫组化染色标记图片

附录5 MVD免疫组化染色标记图片

附录6 实验动物质量合格证

附录7 实验动物设施使用证明

附录8 黄芪甲苷检测表

四 文献综述

1 传统中医对特发性肺纤维化认识与研究

2 现代医学对特发性肺纤维化认识与研究

文献参考文献

致谢

在研期间主要研究成果