用于单子叶植物转化的几丁质酶基因载体构建及玉米再生体系建立

摘要

真菌性病害长期以来一直是限制玉米产量、影响玉米品质的主要病害，严重影响着玉米生产的发展。常规育种技术不仅育种周期长，耗时费力，难以满足生产上对抗病良种的需要，更重要的是玉米抗性资源比较缺乏，限制了传统方法在玉米抗病育种中的成效。基因工程技术在玉米育种上的应用，可以将存在于其它物种的抗病基因引入到玉米种质材料中，提高玉米抗病性，加速抗病育种进程。故本研究从原核表达载体pETChi上切下几丁质酶基因片段，取代植物表达载体pBIUA上的Res基因片段，构建含ubi启动子和几丁质酶基因的适合于单子叶植物表达的载体pBIUC，以期将几丁质酶基因导入玉米优良自交系，为增强玉米对真菌性病害抗性的研究做准备。 植株再生体系的建立，是植物基因工程操作的基础。本研究选取目前国内大面积种植的6个玉米骨干自交系，以幼胚作为外植体，诱导出愈伤组织，并选择愈伤组织诱导率较高的综3、郑58和K12三个品种建立再生体系，同时研究了影响幼胚再生的各种因素。研究表明：2，4-D对玉米幼胚愈伤组织诱导率有很大的影响，愈伤诱导的2，4-D最佳浓度为2.0mg/l；胚性愈伤组织的诱导在很大程度上依赖于基因型，从最高诱导率93.1﹪(综3)到最低诱导率24.4﹪(昌7-2)；玉米幼胚愈伤组织分化成苗时不同基因型所需的最适6-BA浓度也不同，综3的愈伤组织分化成苗的最佳6-BA浓度为1.5mg/l，郑58和K12愈伤组织最适分化成苗的6-BA浓度均为1.0mg/l；本试验建立的移栽程序：分化培养基→再生培养基→花盆中基质培养，可以使移栽成活率达80﹪以上。 本研究选取幼胚再生体系建立时表现最好的基因型综3为材料，以其成熟胚作为外植体，利用正交试验研究了2，4-D、6-BA、NAA、脯氨酸和水解酪蛋白5个因素及组合对综3成熟胚愈伤组织诱导的影响，探讨了正交设计应用于玉米培养基筛选的可能性。同时对诱导出的愈伤组织进行分化培养，以期建立该基因型玉米的成熟胚植株再生体系。研究表明：综3成熟胚愈伤组织诱导的最佳激素组合是2，4-D(2.5mg/l)+6-BA(1.5mg/l)+NAA(1.5mg/l)+脯氨酸(690mg/l)+水解酪蛋白(750mg/l)；对综3成熟胚愈伤组织诱导影响最大的因素是2，4-D，其次是6-BA和NAA，脯氨酸和水解酪蛋白对愈伤组织的形成有一定作用；综3成熟胚诱导出的Ⅰ型胚性愈伤组织，可以通过调整激素的浓度配比，转换为Ⅱ型胚性愈伤；但综3成熟胚诱导出的愈伤组织到目前为止只出现了一些绿点，间或长出了一些类似根的组织，但没有分化成苗。

目录

文摘

英文文摘

缩略语表

Ⅰ前言

Ⅱ文献综述

Ⅲ研究目标、基本思路和技术路线

Ⅳ材料和方法

Ⅴ结果与分析

Ⅵ讨论

Ⅶ小结

致谢

图版及图版说明

参考文献

作者简介

导师简介

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