低鱼粉饲料添加壳寡糖对凡纳滨对虾生长、免疫和抗副溶血弧菌感染能力的影响

摘要

本文以凡纳滨对虾（Litopenaeus vannamei）为试验动物，研究低鱼粉饲料添加壳寡糖对其生长、免疫、肠道健康以及对凡纳滨对虾抗副溶血弧菌感染能力的影响，进一步确定壳寡糖用于凡纳滨对虾饲料中的适宜添加量，为免疫增强剂COS的推广与应用提供理论指导。
　　1.低鱼粉饲料中添加壳寡糖对凡纳滨对虾生长性能的影响
　　选取健康的凡纳滨对虾幼虾1400尾（0.9g左右）随机分为7组，每组4个重复，试验期8周。高鱼粉对照饲料(HFM)，向低鱼粉基础饲料中分别添加0g、3g、6 g、9g、12g和15g(g/kg)10％的壳寡糖预混剂，制作6种低鱼粉试验饲料，记作LFM0、LFM0.3、LFM0.6、LFM0.9、LFM1.2和LFM1.5。结果:各组之间凡纳滨对虾FAW、WGR、SGR、FCR、和SR差异不显著(P＞0.05)，但LFM0.6和LFM0.9两组组SR提高了;LFM0、LFM0.3、LFM0.6、LFM0.9和LFM1.5组之间LDL-C差异不显著（P＞0.05），但显著低于HFM组（P＜0.05），HFM、LFM0.3、LFM0.6和LFM0.9组HDL-C显著高于LFM0组（P＜0.05）。
　　2.低鱼粉饲料中添加壳寡糖对凡纳滨对虾肝胰腺和肠道炎性因子mRNA相对表达量及组织形态的影响
　　肝胰腺中AIF和Cyt-c mRNA相对表达量在LFM0组最高，其他各组之间无显著性差异(P＞0.05)。LFM0、LFM1.2和LFM1.5组HSP70 mRNA相对表达量显著高于其他各组(P＜0.05)。LFM0、LFM1.2和LFM1.5组TGF-β的mRNA相对表达量显著下调(P＜0.05)，而其他各组mRNA相对表达量显著上调(P＜0.05)。LFM0.3组TNF的mRNA相对表达量显著低于HFM、LFM0.6和LFM0.9组(P＜0.05)。肠道中HFM、LFM0.3和LFM0.6组AIF的mRNA相对表达量显著下调(P＜0.05)。HFM、LFM0.3、LFM0.6和LFM0.9组Cyt-c的mRNA相对表达量显著低于LFM0和LFM1.5组(P＜0.05)。HFM、LFM0.3、LFM0.6和LFM0.9组HSP70mRNA相对表达量显著下调（P＜0.05）。HFM和LFM0.6组TGF-β的mRNA相对表达量无显著性差异(P＞0.05)，但显著高于其他组(P＜0.05)。HFM、LFM0.3和LFM0.6组TNF的mRNA相对表达量差异不显著(P＞0.05)，显著高于其他各组(P＜0.05)。与LFM0组相比，HFM组肝小体排列比较紧密，肝小体之间基底膜基本完整，低鱼粉组除LFM0和LFM1.5组外，其他组肝小体排列紧密，且具有明显的R细胞和B细胞，尤以LFM0.6、LFM0.9和LFM1.2组更为紧密。与HFM组相比，LFM0组肠壁完整性遭到破坏，绒毛与肠壁脱离，排列杂乱有断裂，且绒毛较短，而壳寡糖添加组肠壁相对完整。
　　3.低鱼粉饲料中添加壳寡糖对凡纳滨对虾免疫及抗副溶血弧菌感染能力的影响
　　HFM组AKP和NOS活力显著高于其他组(P＜0.05);LFM0.3组ACP活力显著高于其他LFM组(P＜0.05);HFM、LFM0.3和LFM0.6组LZM活力显著高于其他各组(P＜0.05)。HFM和LFM1.5组ACP活力显著低于其他各组(P＜0.05);肝胰腺碱性磷酸酶(AKP)活力HFM组与LFM0.3、LFM0.9和LFM1.2组差异不显著(P＞0.05)，LFM1.5组显著低于其他各处理组(P＜0.05)。HFM组和LFM1.5组之间肝胰腺谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)活力差异不显著(P＞0.05)，显著低于其他各处理组(P＜0.05)，低鱼粉组之间LFM0.3、LFM0.6和LFM0.9组最高，显著高于其他组(P＜0.05);T-SOD活力LFM0.3组显著高于HFM组及其他LFM组(P＜0.05);LFM0.9组T-AOC显著高于HFM组和其他LFM组(P＜0.05)。肝胰腺免疫基因HFM和LFM0.3组mRNA相对表达量差异不显著(P＞0.05)，显著高于其他各组(P＜0.05)。HFM组ACP的mRNA相对表达量显著高于其他各处理组(P＜0.05)。LFM0.3和LFM0.6组Crustin的mRNA相对表达量显著高于其他各处理组(P＜0.05)。HFM、LFM0.6和LFM0.9组Pen3a的mRNA相对表达量显著高于其他各处理组(P＜0.05)。LFM0.3和LFM0.5组proPO的mRNA相对表达量最高，显著高于其他各处理组（P＜0.05）。感染副溶血弧菌后，添加壳寡糖组死亡率低于LFM0组。

目录

声明

摘要

主要符号表

1．1 研究目的与意义

1．2 研究内容

1．3 文献综述

1．3．1 壳寡糖的来源及理化特性

1．3．2 壳寡糖的生物学功能

1．3．3 壳寡糖在水产养殖中的研究进展

第2章 低鱼粉饲料中添加壳寡糖对凡纳滨对虾生长性能的影响

2．1 材料与方法

2．1．1 试验饲料

2．1．2 实验动物与饲养管理

2．1．3 样品采集与处理

2．1．4 指标测定与方法

2．1．5 计算及统计方法

2．2 结果

2．2．1 低鱼粉饲料中添加壳寡糖(COS)对凡纳滨对虾生长性能的影响

2．3 讨论

2．3．1 低鱼粉饲料中添加壳寡糖对凡纳滨对虾生长性能及血清生化指标的影响

2．4 小结

第3章 低鱼粉饲料中添加壳寡糖对凡纳滨对虾肝胰腺和肠道组织健康状况及肠道炎性因子的影响

3．1 材料与方法

3．1．1 试验饲料

3．1．2 实验动物与饲养管理

3．1．3 Bouin氏固定液的配制

3．1．4 样品采集与处理

3．1．5 指标测定与方法

3．1．6 实时荧光定量PCR

3．1．7 计算及统计方法

3．2 结果

3．2．1 低鱼粉饲料中添加壳寡糖对凡纳滨对虾肝胰腺和肠道中相关炎性因子mRNA相对表达量的影响

3．2．2 低鱼粉饲料中添加壳寡糖对凡纳滨对虾肝胰腺和肠道组织形态的影响

3．3 讨论

3．3．1 低鱼粉饲料中添加壳寡糖对凡纳滨对虾肝胰腺和肠道炎性因子mRNA相对表达量的影响

3．3．2 低鱼粉饲料中添加壳寡糖对凡纳滨对虾肝胰腺和肠道组织形态的影响

3．4 小结

第4章 低鱼粉饲料中添加壳寡糖对凡纳滨对虾非特异性免疫及抗副溶血弧菌感染能力的影响

4．1 材料与方法

4．1．1 试验饲料

4．1．2 实验动物与饲养管理

4．1．3 菌种培养及攻毒方式

4．1．4 样品采集与处理

4．1．5 肝胰腺免疫基因RNA提取

4．1．6 指标测定及方法

4．1．7 计算及统计方法

4．2 结果

4．2．1 低鱼粉饲料中添加壳寡糖(COS)对凡纳滨对虾非特异性免疫指标的影响

4．2．2 低鱼粉饲料中添加壳寡糖对凡纳滨对虾肝胰腺中相关免疫基因mRNA相对表达量的影响

4．3．3 低鱼粉饲料中添加壳寡糖对凡纳滨对虾抗副溶血弧菌感染能力的影响

4．3 讨论

4．3．1 低鱼粉饲料中添加壳寡糖对凡纳滨对虾非特异性免疫指标的影响

4．3．2 低鱼粉饲料中添加壳寡糖对凡纳滨对虾肝胰腺中相关免疫基因mRNA表达量的影响

4．3．3 低鱼粉饲料中添加壳寡糖对凡纳滨对虾抗副溶血弧菌感染能力的影响

4．4 小结

第5章 全文总结

致谢

参考文献

在学期间研究成果情况