对虾白斑综合症病毒极早期基因WSV083和南美白对虾信号传导与转录激活因子的研究

摘要

对虾白斑综合症病毒(white spot syndrome virus,WSSV)是困扰对虾养殖业最主要的病原体,严重制约了对虾养殖业的发展。在研究作为病原宿主的对虾免疫机制的同时,探究病毒感染机制可以有针对性地提高虾体自身的抗病毒能力,从而达到根本防治WSSV的目的。
　　WSSV 可以通过结合对虾整合素 Integrin 来调控信号分子黏着斑激酶(FAK)的活性,并对其下游信号通路进行干扰；另一方面,病毒编码的蛋白激酶可以调控宿主信号通路,并被认为在病毒感染过程中具有重要作用。WSV083 是 WSSV 编码的一个含有丝氨酸/苏氨酸蛋白激酶结构域的极早期基因。研究发现,在昆虫细胞中共表达 WSV083 和日本囊对虾的黏着斑激酶(MjFAK)可以抑制MjFAK的磷酸化活性并且可以抑制细胞粘附活性。另外,在对虾活体内通过 RNAi技术干扰 MjFAK的表达后会加速感染病毒后的对虾死亡率。因此,我们推测WSV083可能通过抑制FAK磷酸化活性从而在病毒感染过程中具有重要作用。
　　信号传导与转录激活因子在基因转录过程中具有重要作用。已有研究表明对虾 STAT 分子与病毒感染关系密切。在本实验中,我们通过体内及体外实验证明除了已报道的 WSV069 启动子外,对虾 STAT 还可以结合另外两个病毒极早期基因WSV051及WSV249的启动子DNA,表明WSSV可以俘获对虾STAT因子以辅助病毒基因的转录表达。此外通过建立的染色体免疫共沉淀方法为今后研究病毒调控宿主基因表达提供有力工具。本研究论文对 WSSV 极早期基因WSV083 蛋白及南美白对虾信号传导与转录激活因子(LvSTAT)进行了初步研究,为今后研究病毒宿主在感染过程中的互作关系打下基础。

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前言

1 对虾的养殖现状

2 对虾白斑综合症病毒(WSSV)研究进展

3 对虾免疫及细胞信号转导分子研究进展

4 RNAi的作用机理及其应用

5 染色体免疫共沉淀技术简介

6 本论文的研究目的及意义

第一章 WSSV极早期基因WSV083对日本囊对虾黏着斑激酶（focal adhesion kinase, FAK）的调节研究

1材料和方法

2 结果

3讨论

4展望

第二章 南美白对虾信号传导与转录激活因子（STAT）对

1材料和方法

2结果

3讨论

4展望

参考文献

附录

致谢