不同冲洗液对海水浸泡软组织伤影响的实验研究

摘要

开放性损伤是一个复杂的病理变化过程，不论平时或战时都较多见。因伤口多有污染，如处理不及时或不当，易发生感染，影响愈合和肢体的功能恢复，严重者可造成残废甚至危及伤员的生命。过去的研究多集中在开放性损伤本身，而对影响损伤进程的环境因素涉及较少。海洋生态环境与陆地生态系统有着本质的区别，发生在海水中的开放性损伤是指渔民或海战中伤员受海水浸泡的一类特殊损伤，该类伤员的救治是目前我们医务人员面临的重要课题。目前国内外对合并海水浸泡的开放性损伤的伤情特点、发病机制及临床救治均极少见文献报道。本研究旨在通过海水浸泡软组织伤的动物模型，在海水浸泡结束后立即应用不同浓度的低渗盐水对伤口进行冲洗干预，电镜下观察肌细胞、肌间质损伤变化及细胞凋亡情况，研究海水及低渗盐水的干预对开放性伤口的影响，以及对组织可能带来的病理改变及对检测细胞凋亡相关基因Caspase3基因mRNA表达的影响，了解组织Na+，K+-ATPase活性的变化，初步确定低渗盐水冲洗在该类创伤早期清创中的重要性，为临床外科早期清创治疗提供理论依据。 目的：建立海水浸泡兔软组织伤的动物模型，观察不同浓度低渗盐水冲洗后海水浸泡软组织伤的病理变化及细胞凋亡，并对其机制作进一步探讨，为临床收治大量海水浸泡软组织伤的初步处理提供依据。 方法：将新西兰大白兔60只随机分为生理盐水冲洗组(A组)、无菌蒸馏水冲洗组(B组)、0.45％低渗盐水冲洗组(C组)、单纯海水浸泡组(D组)各15只。利用兔后腿软组织损伤、海水浸泡模型，分别于损伤后浸泡于海水中2小时，浸泡后分别进行各种低渗盐水冲洗，分别于干预处理后1h、3h、6h、8h、12h，在损伤周围0.5cm范围内的肌肉组织中取材，0.5cm3损伤组织用4％福尔马林固定，HE染色，光镜下观察损伤组织的细胞浸润情况，用免疫组化法检测受伤肌肉组织凋亡相关基因Caspase3表达情况；1 mm3损伤组织用1％戊二醛-％多聚甲醛混合固定液(pH7.4)4℃固定，电镜观察其细胞凋亡及细胞膜、线粒体等结构的变化；生化检测Na+，K+-ATPase活性，了解其组间的差别。 结果：1、切取标本时损伤区域的大体观察：A组(生理盐水冲洗组)动物除出现肌肉组织水肿，表现为表面瘀血、浅表静脉扩张，可见到轻度糜烂、出血点；B组(无菌蒸馏水冲洗组)以肌肉组织水肿为主，微血管扩张、渗血明显，极少见创面坏死糜烂；C组(0.45％低渗盐水冲沈组)由于所用的冲洗液的浓度介于前两组之间，创面兼有肌肉组织水肿、坏死糜烂，且都占较大比重：D组(单纯海水浸泡组)肌肉组织可见到明显肿胀，充血、渗出、出血、糜烂最重，其中6h是明显损伤加重，12h时最为严重。2、光镜及电镜下的病理改变：A组(生理盐水冲洗组)、B组(蒸馏水冲洗组)动物软组织HE染色在显微镜下肌肉组织结构分层较清晰，肌肉纤维纹理清楚，结构保持比较完整，各部肌细胞形态正常。C组(0.45％低渗盐水冲洗组)和D组(单纯海水浸泡组)所有动物损伤软组织切片均能观察到损伤部位肌肉、软组织的变性，表现为散在的斑片状的空泡样的变性，肌纹理扭曲不规则，及大量的白细胞浸润，散在的红细胞。伤后1小时，各组之间病理改变差别不明显。伤后3h的病理特征为出现不同程度的水肿改变。在6h，8h，12h组，D组肌肉纤维肿胀更加显著。HE染色显示的各组之间病理改变比较，动物海水浸泡伤的肌组织水肿的高峰时间和严重程度均有差别，B组(蒸馏水冲洗组)肌肉组织水肿、坏死高峰时间出现在伤后8h，伤后12h的组织水肿程度与8h的观察相差无几；但是在D组(单纯海水浸泡组)，肌肉组织变性坏死高峰时间出现在伤后6h，且随时间延长水肿持续加重，12h组所观察到的组织水肿程度明显要重于6h组，也比A组内任意时间组的水肿程度都要严重的多，且两组之间差异明显。3、Caspase3基因mRNA水平的表达：A组(生理盐水冲洗组)、正常组光镜观察均无明显改变。B(蒸馏水冲洗组)、C组(0.45％低渗盐水冲洗组)和D组(单纯海水浸泡组)观察各分析时相点肌肉、组织主要显示为斑片状分布的坏死组织，可见散在分布的凋亡肌细胞，且有大量的白细胞、白细胞浸润。在伤后1h，各组之间创伤病理改变差别不明显，随着时间推移肌细胞凋亡更加显著，且各组之间差异明显。随着观察时间的延长，A，B、C、D各组Caspase3阳性神经细胞0D值均呈现增加趋势。组间比较，D组(海水浸泡伤组)Caspase3阳性表达神经细胞0D值在各时间组均高于其余各组。统计学分析各组之间的差异具有统计学意义(P<0.05)。4、Na+，K+-ATPase活性的检测：A(生理盐水冲洗组)组，Na+，K+-ATPase活性先下降后逐渐上升至基本正常，其余各组活性变化趋势基本一致，其中蒸馏水冲洗组(B组)较生理盐水冲洗组(A组)偏低，0.45％低渗盐水冲洗组(C组)次之，单纯海水浸泡组(D组)活性最低。各观察时间段，生理盐水冲洗组(A组)一直处于最高水平。 结论：1、海水浸泡开放性伤口在治疗早期用生理盐水冲洗，与无菌蒸馏水、0.45％低渗盐水冲洗相比，从大体观察、病理、生化各方面相比明显优于后两组；2、海水浸泡开放性伤口早期救治，积极使用生理盐水冲洗，对伤口进行彻底清创，使受伤区组织早期脱离高渗、碱性环境，早期恢复生理状态有重要意义。

目录

文摘

英文文摘

声明

前言

材料与方法

结果

分析与讨论

结论

参考文献

附 录

文献综述 开放性外伤后海水浸泡对机体病理生理的影响

致 谢

个人简历、在校期间发表论文情况