从Shh通路探讨电针对缺血性脑卒中的神经保护作用与神经干细胞/祖细胞的影响

摘要

目的:通过电针左侧大脑中动脉缺血大鼠患侧肢体“曲池”、“足三里”穴，观察大鼠脑缺血后左侧大脑皮质sonic hedgehog信号通路相关分子的表达及巢蛋白的变化，以探讨电针“曲池”“足三里”在治疗脑缺血中的机制。
　　方法:将72只SD大鼠随机分为假手术组24只及MCAO组48只，采用左侧大脑中动脉阻塞(Middle Cerebral Artery Occlusion，MCAO)再灌注对MCAO组对大鼠进行缺血再灌注损伤造模。再灌注后2h对大鼠进行神经行为学评分，剔除不合格大鼠，并将MCAO组大鼠随机分为模型组和电针组，其中电针组每日进行电针干预，取大鼠患侧肢体“曲池”及“足三里”穴，频率1-20Hz，每日1次，30min/次，共3d.分别于缺血再灌注后24h、48h及72h对模型组及电针组的大鼠进行神经行为学评分，并于72h后进行取材，采用TTC染色以观测电针后MCAO大鼠的脑梗体积变化、采用神经行为学评分以评估MCAO大鼠神经功能改善情况、采用homecage实时检测大鼠动物行为学上的变化、采用Western blot及realtime PCR检测shh信号通路相关因子的蛋白及基因表达、采用免疫组化及免疫荧光检测各组大鼠nestin、GFAP形态学上的变化。
　　结果:(1)缺血再灌注24h后，电针组与模型组在神经行为学评分上无显著统计学差异(P＞0.05)，再灌注72h后，电针组神经功能缺损症状较模型组明显改善(P＜0.05);
　　(2)homecage显示模型组在笼舍内总路程短于假手术组(P＜0.05)，而电针组的总路程长于模型组(P＜0.05)，模型组的整饰时间及转弯活动时间短于假手术组(P＜0.05)，而电针组长于模型组(P＜0.05);
　　(3)而电针组的脑梗死体积也较模型组显著减小(P＜0.05);
　　(4)模型组及电针组大鼠皮质shh信号通路相关因子的蛋白及基因的表达较假手术组增高，而电针组的增高较模型组更为显著(P＜0.05);
　　(5)免疫组化显示脑缺血再灌大鼠缺血侧皮质Nestin、GFAP的表达量较假手术组显著增高(P＜0.05)，而电针组的增高较模型组明显(P＜0.05)，免疫荧光显示脑缺血后出现Nestin/GFAP阳性表达，而电针组较模型组明显。
　　结论:shh通路的激活可能参与了电针“曲池”及“足三里”穴对缺血性脑卒中的神经保护作用。

目录

声明

摘要

前言

实验研究

1．实验材料

1．1 实验动物

1．2 主要实验器械

1．3 主要实验试剂及溶液配置

1．4 主要实验设备

2．实验方法

2．1 左侧大脑中动脉缺血再灌损伤大鼠的模型制备

2．2 神经行为学评分及动物模型剔除标准

2．3 动物的干预方法

2．4．标本的获取与处理

2．5 大鼠神经行为学评分

2．6 homecage实时监测大鼠动物行为学改变

2．7 大鼠全脑TTC染色

2．8 western blot法检测大鼠左侧皮质相关蛋白的表达

2．9 realtime PCR法检测大鼠左侧皮质相关基因的表达

2．10 免疫组化法检测Nestin、GFAP的表达

2．11 免疫荧光法检测nestin、GFAP的表达

2．12 数据统计分析

2．13 技术路线图

3．实验结果

3．1 电针大鼠患肢“曲池”及“足三里”穴能显著改善大鼠的神经行为学评分及大鼠的行为活动

3．2 电针大鼠患肢“曲池”及“足三里”穴能显著减少脑缺血后的脑梗死体积

3．3 电针“曲池”“足三里”激活了脑缺血再灌大鼠皮质shh信号通路相关因子的表达

3．4 电针“曲池”“足三里”激活了细胞周期因子的表达

3．5 电针促进了脑缺血后左侧皮质缺血周围区Nestin、GFAP的表达

3．6 免疫荧光法检测左侧皮质缺血周围区Nestin、GFAP的表达情况

4．讨论

4．1 电针与缺血性脑卒中

4．2 电针治疗脑卒中的相关中医学理论

4．3 神经千细胞与缺血性脑卒中

4．4 Shh通路与神经干细胞

4．5 本研究的不足与展望

实验结论

参考文献

附录

致谢

文献综述 神经干细胞与脑缺血卒中的相关机制研究进展

作者简历