复方葡萄籽胶囊抗实验性黄褐斑作用及功效成分测定研究

摘要

目的:
　　通过研究复方葡萄籽胶囊对实验性黄褐斑小鼠体内SOD、MDA、GSH-PX活力的影响，探讨复方葡萄籽胶囊抗氧化作用机制，优选最佳配方比;同时测定复方葡萄籽胶囊中丹参素与原花青素的含量。为进一步研制开发成为防治黄褐斑的新型保健食品提供实验数据，亦为今后质量标准制定提供依据。
　　方法:
　　1、雌性昆明种小鼠50只，随机分为空白组、模型组、复方葡萄籽胶囊高、中、低剂量组，共5组，每组10只。给药组分别用195、130和65 mg/kg复方葡萄籽胶囊灌胃，空白组与模型组按体重用一定体积双蒸水灌胃;模型组与给药组同时用10mg·kg-1黄体酮注射大腿根部，每日1次，每周6次，两侧交替;背部脱毛(面积为1.5 cm×1.5 cm)，置光毒仪中于320 nm波长紫外线下照射20 min，每日1次，每周6次。30d后取肝脏，制备血清和肝匀浆，测定小鼠血清肝脏各指标。
　　2、通过高效液相色谱法(HPLC)测定丹参素含量。胶囊内容物精密加入50％甲醇25 mL超声处理30 min放冷后称定质量，并用50％甲醇补足减失的重量。以甲醇-1％冰醋酸(5∶95)为流动相等度洗脱色谱柱为Eclipse Plus C18(4.6×250 mm，5μm)色谱柱，;流速为1.0 mL·min-1，进样量为10μL;柱温30℃;检测器为二极管阵列检测器，波长281 nm。理论板数按丹参素钠峰计应不低于4000。
　　3、铁盐催化比色法测定原花青素含量。精确称取样品1.000 g左右于100 mL容量瓶中，加入适量甲醇，超声处理10 min，定容，离心备用。精密吸取样品待测液1 mL于10 mL具塞试管中，加入0.2 mL2％NH4Fe(SO4)2.12H2O溶液和6mL酸性正丁醇溶液。95℃的水浴中加热反应40 min，取出，于冰水中迅速冷却，溶液显红色，以空白管作对照，紫外可见分光光度计550 nm处测定其吸光度。由标准曲线回归方程算出含量，按其稀释倍数求得样品中原花青素总含量。
　　结果:
　　1、小鼠黄褐斑模型血清中SOD、GSH-PX活性明显降低、MDA增加，低、中、高三个剂量组分别给药后，与模型对照组相比，给药组均表现出明显改善作用，中、高剂量组与模型组比较有显著性(p＜0.05），并具有剂量依赖性，同时中、高剂量组复方葡萄籽胶囊可以明显升高小鼠肝脏的SOD活力，降低MDA水平(p均＜0.05）。
　　2、HPLC法测定丹参素含量结果:含量测定在11.3μg/mL-226μg/mL范围内线性关系良好，线性方程为y=7.351x-18.88(r=0.9954)，平均回收率为99.77％，RSD=0.92％(n=6)。样品平均含量为4.2139 mg/g，三批样品中含量相对标准偏差RSD=0.4652％。
　　3、铁盐催化比色法测定原花青素含量结果:含量测定在47.5μg/mL-984.8μg/mL范围内线性关系良好，最小二乘法计算得到原花青素浓度-吸光度线性方程为y=0.001x+0.023(r=0.9992)，平均回收率为99.06％(n=9)。样品平均含量6.3958 g/100 g。显色30 min内含量测定无差异，三批样品测定含量相对标准偏差RSD=1.4409％。
　　结论:
　　复方葡萄籽胶囊各三剂量组可以明显提高小鼠血和肝脏中SOD、GSH-PX活力，降低MDA含量，表明复方葡萄籽胶囊胶囊具有良好的抗氧化作用，对黄体酮与紫外线诱导的小鼠黄褐斑模型具有良好的防治作用。同时表明黄褐斑的发病原因是多方面的，与体内抗氧化失衡与外界紫外线刺激均有联系。
　　含量测定结果显示，复方葡萄籽胶囊有效成分稳定，为今后保健食品开发的质量控制提供了科学依据。

目录

声明

摘要

前言

第一章 复方葡萄籽胶囊对实验性黄褐斑的抗氧化作用研究与配比优选

1．引言

2．实验材料

2．1 实验动物及饲料

2．2 实验仪器

2．3 实验药品及试剂

2．4 试剂的配制

3．实验方法

3．1 动物分组与造模

3．2 小鼠血清与肝匀浆的制备

3．3 小鼠血清与肝脏各指标测定方法

3．4 统计学方法

4．实验结果

4．1 复方葡萄籽胶囊对小鼠SOD活性的影响

4．2 复方葡萄籽胶囊对小鼠MDA含量的影响

4．3 复方葡萄籽胶囊对小鼠GSH-PX活性的影响

5．讨论

第二章 铁盐催化比色法测定复方葡萄籽胶囊中原花青素的含量

1．引言

2．实验材料

2．1 实验仪器

2．2 样品与试剂

3．实验方法

3．1 对照品溶液的制备

3．2 标准曲线的制备

3．3 样品的制备

4．实验结果

4．1 测定原理

4．2 显色稳定性

4．3 标准曲线及线性范围

4．4 最低检出限

4．5 精密度实验

4．6 重复性实验

4．7 样品实际测定和回收率实验

5．讨论

5．1 原花青素检测方法的选择

5．2 测定中的误差分析

第三章 HPLC法测定复方葡萄籽胶囊中丹参素的含量

1．引言

2．实验材料

2．1 实验仪器

2．2 样品与试剂

3．实验方法

3．1 溶液的制备

3．2 色谱条件

4．实验结果

4．1 专属性试验

4．2 标准曲线及线性范围

4．3 精密度实验

4．4 稳定性实验

4．5 重复性实验

4．6 加样回收率实验

4．7 样品含量测定

5．讨论

5．1 样品溶液的制备

5．2 流动相的选择

5．3 检测波长的选择

结论

参考文献

附录

致谢

文献综述

作者简历