复方白花蛇舌草减轻大肠癌5-FU化疗肠道损伤的作用机制研究

摘要

目的：通过研究复方白花蛇舌草对大肠癌荷瘤小鼠经5-氟尿嘧啶（5-fluorouracil，5-FU）化疗后引起肠道损伤的影响及其作用机制，以期为进一步的临床应用提供理论依据。
　　方法：取对数生长期的鼠源性CT26结肠癌细胞株，制备成单细胞悬液，按2×106个/只的细胞量，接种于BABL/c小鼠右前肢腋窝处皮下，建立皮下移植瘤小鼠模型。待瘤体生长至100-300mm3时，按照瘤体体积将小鼠随机分为对照组、复方白花蛇舌草组、5-FU组、5-FU+复方组，共4组，每组8只。其中，5-FU+复方组和5-FU组分组后，即给予腹腔注射5-FU(150mg/kg)1次，同时分别给予复方白花蛇舌草(2g/kg)及等量生理盐水灌胃给药4天;复方白花蛇舌草组和对照组分组后给予腹腔注射等量生理盐水，并分别给予复方白花蛇舌草及等量生理盐水灌胃给药4天。每天观察小鼠的一般情况（毛色、饮食、活动度等），称量记录各组小鼠的体重及瘤体体积，并做好记录。每天观察各组小鼠的腹泻情况，并进行评分量化。实验结束后，眼球取血，后采用颈椎脱臼法处死小鼠，分离小鼠的胸腺、脾脏并称重计算其器官指数，对分离的空肠组织进行固定包埋，制作石蜡切片。随后，采用全自动血液分析仪分析检测小鼠血液中红细胞、白细胞及血小板的数量;计算小鼠胸腺和脾脏指数;采用苏木素-伊红染色(HE)观察复方白花蛇舌草对空肠组织病理形态学改变的影响;采用TUNEL法检测复方白花蛇舌草对5-FU引起的肠道细胞凋亡的影响;采用免疫组织化学染色法检测复方白花蛇舌草对空肠组织中Bcl-2、Bax、PCNA、Cyclin D1、CDK4、p21等在蛋白水平表达的影响;采用ELISA检测复方白花蛇舌草对小鼠血清中炎症因子（TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-10）的影响。
　　结果：与对照组和复方白花蛇舌草组相比，从第3天开始，5-FU组小鼠体重明显下降，瘤体体积明显减小，且均出现腹泻症状(P＜0.05)，给予复方白花蛇舌草干预后，对5-FU引起的体重减轻症状没有显著改善(P＞0.05)，对5-FU抑制瘤体生长也没有显著的协同效应(P＞0.05)，但能够显著改善5-FU引起的腹泻症状(P＜0.05);血常规检测结果显示，5-FU可明显减少体内白细胞和血小板的数量(P＜0.05)，但对红细胞数量没有明显影响（P＞0.05），复方白花蛇舌草干预后，可显著升高5-FU引起的白细胞减少的作用(P＜0.05);小鼠的胸腺和脾脏指数显示，复方白花蛇舌草未能显著改善5-FU引起的小鼠胸腺和脾脏指数下降的作用(P＞0.05);病理切片观察到5-FU能够引起不同程度的肠道黏膜损伤，如肠黏膜绒毛变短，肠上皮细胞水肿，炎性细胞浸润，固有层水肿等，复方白花蛇舌草干预可明显减轻5-FU引起的肠道黏膜损伤;TUNEL实验结果显示，5-FU组小鼠肠道组织内肠腺窝细胞发生大量凋亡(P＜0.05)，复方白花蛇舌草能够显著降低5-FU引起的肠细胞凋亡(P＜0.05);免疫组织化学(IHC)染色结果显示，5-FU组空肠组织中Bcl-2、PCNA、Cyclin D1、CDK4的表达明显下降(P＜0.05)，Bax、p21的表达显著升高（P＜0.05），与5-FU组相比，复方白花蛇舌草干预后，能够显著上调Bcl-2、PCNA、Cyclin D1、CDK4的表达(P＜0.05)，下调Bax、p21的表达(P＜0.05);ELISA结果显示，5-FU组小鼠血清中，TNF-α、IL-1β、IL-6的含量明显升高(P＜0.05)，IL-10的含量显著下降(P＜0.05)，与5-FU组相比，复方白花蛇舌草干预后，TNF-α、IL-1β、IL-6的水平明显下降(P＜0.05)，IL-10的水平显著升高(P＜0.05)。另外，对照组和复方白花蛇舌草组之间的瘤体体积、小鼠体重、腹泻症状、血细胞的数量、胸腺和脾脏指数、空肠组织损伤程度、肠道细胞凋亡情况以及增殖凋亡和炎症相关蛋白的表达均无明显差异（P＞0.05）。
　　结论：(1)复方白花蛇舌草能够缓解5-FU所致的肠道损伤，能显著改善小鼠的腹泻症状及减轻肠道黏膜损伤程度。(2)复方白花蛇舌草能够调节肠道细胞的增殖凋亡相关蛋白的表达及炎症相关的因子的水平来减轻5-FU引起的肠道损伤，其可能是复方白花蛇舌草减轻5-FU所致肠道损伤的作用机制之一。

目录

声明

摘要

英文缩略词表

引言

实验材料与方法

1 细胞株及动物

1．1 细胞株

1．2 动物

2 药物、试剂、耗材及仪器

2．1 药物

2．2 主要试剂及耗材

2．3 主要仪器

3 实验方法

3．1 实验使用试剂的配制

3．2 细胞相关实验

3．3 移植瘤模型

3．4 动物分组

3．5 给药方法

3．6 瘤体体积和体重的测量

3．7 标本采集

3．8 观察指标及检测方法

4 数据处理方法

实验结果

1．2 复方白花蛇舌草对5-FU引起的小鼠体重变化的影响

1．3 复方白花蛇舌草对小鼠移植瘤瘤体体积的影响

2 复方白花蛇舌草对5-FU引起小鼠腹泻症状的影响

3 复方白花蛇舌草对小鼠胸腺和脾脏指数的影响

4 复方白花蛇舌草对小鼠体内红细胞、白细胞及血小板数量的影响

5 复方白花蛇舌草对5-FU引起的空肠组织损伤的影响

6 复方白花蛇舌草对小鼠肠道细胞凋亡的影响

7 复方白花蛇舌草对各组小鼠空肠组织肠腺隐窝细胞中凋亡蛋白Bcl-2、Bax表达的影响

8 复方白花蛇舌草对小鼠空肠组织中增殖相关蛋白(PCNA、Cyclin D1、CDK4、p21)表达的影响

9 复方白花蛇舌草对小鼠血清中炎症相关因子(TNF-α、IL-1β、IL-6、IL-10)表达的影响

讨论

结论

问题与展望

参考文献

文献综述 中医药对肿瘤化疗药物增效减毒作用的研究进展

致谢

作者简历