SS2溶菌酶释放蛋白(MRP)B细胞表位预测、原核表达及免疫学特性研究

摘要

目的：预测猪链球菌2型(SS2)溶菌酶释放蛋白(MRP)的B细胞表位，并分析其免疫学特性。方法：运用ANTHEPROT 5.0综合分析二级结构、亲水性、表面可及性与抗原性指数，预测MRP的B细胞优势表位簇;PCR扩增出表达预测的抗原肽段的基因(mrp-1)，构建重组原核表达载体pET32a-mrp-1，IPTG诱导表达，以渗透性休克法纯化重组蛋白;使用重组蛋白免疫血清和灭活SS2免疫血清Western blot检测重组蛋白的免疫原性及其与SS2免疫血清的反应性;纯化的重组蛋白免疫雌性SPF昆明小鼠，SS2攻毒受试动物评估重组蛋白对小鼠的免疫保护力。结果：Western blot显示预测的95 0～1210aa肽段与PET32a重组表达的蛋白(MRP)具有良好的免疫原性和反应性;攻毒试验结果表明重组蛋白对小鼠的免疫保护率为菌体免疫所提供保护率的66.7％。结论：本研究为利用该细胞表位簇作为高效免疫制剂奠定了基础。