库尔勒香梨苹果褪绿叶斑病毒RNAi技术抗病研究

摘要

为了初步研究苹果褪绿叶斑病毒(ACLSV)中CP、MP基因的功能及致病相关性,根据Genbank中登录的ACLSV序列设计简并引物,通过RT-PCR扩增CP基因5'端序列377bp(PCR-CLA)和MP基因3'端序列354bp(PCR-CLB)作为靶标基因.以植物表达载体pBi35SG12为骨架载体,卡那霉素抗性基因为筛选基因,将靶标基因的正向序列和反向重复序列分别插入到内含子(intron)的两侧,构建RNAi载体pBi35S_CLA和pBi35S_CLB,利用农杆菌介导的方法转化西方烟(Nicotiana occidentalis).提取各转化植株的基因组DNA,然后通过PCR检测pBi35S_CLA和pBi35S_CLB,结果表明分别获得27株和24株阳性转基因植株.将鉴定后的转基因烟草移栽到土壤中,继续培养到有4-6片真叶后进行汁液摩擦接毒实验.通过观察接毒后的转基因植株的症状和进一步的分子检测,评价各载体的干扰效果,初步认为两个RNAi载体的转基因植株不能完全抵抗ACLSV的侵染,但在病毒的侵染过程中,与野生型西方烟比较,部分的转基因植株能一定程度地延缓病毒症状的发生,在后期发展中,能很大程度地降低该病毒所引起的严重为害,减轻了感病植株叶片的黄化、白化或枯死,对病毒产生了一定的干扰作用.