非洲猪瘟快速检测方法的建立及主要免疫原基因P54的原核表达

摘要

非洲猪瘟是由非洲猪瘟病毒引起的一种急性、发热性、高度接触传染性疾病。世界动物卫生组织将其列为A类动物疫病，我国也将其列为一类动物疫病。本研究通过对非洲猪瘟主要免疫原基因P54基因序列进行分析，查找出P54蛋白的跨膜区在34-53氨基酸残基之间。应用PCR技术，扩增出P54基因跨膜信号肽缺失片段，经克隆和测序后构建出重组表达质粒pET-P54q，与P54全长序列的原核表达质粒pET-28b-P54，转化Rostta表达菌。重组菌经IPTG诱导，SDS-PAGE结果表明，pET-28b-P54的表达量较少，而pET-P54q表达量较高。用钴柱亲和层析纯化，得到跨膜信号肽缺失的P54融合蛋白。P54是主要免疫原，可以用于血清学检测，鉴于我国目前不能引进病毒，因此P54蛋白也具备作为亚单位疫苗的可能性。同时基于非洲猪瘟病毒(ASFV)P54基因，建立了纳米PCR检测方法，该方法特异性强，敏感性高，检测下限均达101copies/μL，是常规PCR检测技术敏感性的1000倍。对黑龙江、吉林和河南三个省份的8个地区临床送检的69份样品进行检测，检测结果显示均为阴性。