肠道病毒71型重组VP1蛋白的原核表达及初步鉴定

摘要

目的:利用大肠杆菌原核表达系统表达并纯化肠道病毒71型(EV71)VP1蛋白,并对重组蛋白功能进行初步鉴定。方法：PCR扩增EV71 VP1全长基因,在测序正确的基础上将其插入表达载体pEI30a(+),构建表达质粒pET30a(+)/VP1,转化表达菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,利用Ni2+素和层析柱对重组蛋白进行纯化,经ELISA和Western Blot验证EV71 VP1的抗原性。结果：成功构建pET30a(+)/VP1重组质粒,经大肠杆菌表达、纯化获得分子量约为38kDa的融合蛋白,经ELISA和Western Blot结果显示该蛋白有良好的抗原性。结论：实现了肠道病毒71型VP1蛋白的原核高效表达,为肠道病毒71型诊断试剂和疫苗的研究奠定了基础。