复方莪术散防治子宫内膜异位症的临床与实验研究

摘要

目的:临床观察复方莪术散(compound zedoray rhizome,CNR)防治子宫内膜异位症(endometriosis,EMS)患者手术后复发;动物试验观察CNR用药的安全性以及探索CNR防治EMS术后复发机理,为CNR临床推广应用提供依据.方法:选择腹腔镜手术后经病理证实为EMS,符合肾虚血瘀症患者为研究对象.A方案:分CNR组与孕三烯酮组.B方案:分CNR组与达菲林组、另设CNR组+达菲林组.C方案:分CNR组与对照组(AFS分期为Ⅱ期——Ⅳ期).三个方案均连续用药3个月并随访观察.选取昆明雌性小鼠进行CNR急性毒理实验、选取wistar雌性大鼠进行CNR长期毒理实验.以非动情期造模方法复制wistar大鼠EMS模型,随机分为CNR组(由莪术、三棱、淫羊藿、元胡、黄芪组成),模型组,西药对照组,正常对照组;连续给药28天后,解剖各组动物,采取各项标本.用激光多普勒血流仪测定:左侧卵巢微循环血流值和双侧异位灶微循环血流值.选用LG-R-80型血液粘度测试仪测定:血流变学各项指标.检测血清IL-2、IL-IO选用ELISA方法.应用免疫组织化学和荧光细胞免疫化学方法检测:VEGF、MMP-2、bcl-2/bax蛋白表达.TUNEL法检测雕亡指数.实时荧光定量PCR测定:survivin mRNA、caspase-3m RNA.流式细胞仪测定:CD3,CD4,CD8和anti-rat IL-4,anti-rat IFN-γ.结果:A方案:CNR组与孕三烯酮组相比无差异,但CNR组无肝肾功能损伤及中断治疗.B方案:CNR、达菲林、CNR+达菲林三组相比无差异,但副反应发生率CNR组为12.77％,达菲林组为86.11％,达菲林+CNC组为88.46％(P＜O.05).C方案:CNR组与对照组总有效率分别为95.7％、77.5％(P＜O.05),两组复发率分别为4.3％、22.5％(P＜O.05).CNR急性毒理实验未发现急性毒性反应.长期毒理实验检测的血细胞、生化各项指标以及病理学检查均未发现异常.大鼠CNR治疗组与EMS模型组比较:血液流变学指标:全血高切粘度,全血低切粘度,血浆粘度,红细胞刚性指数,差异显著P＜O.05.CNR组降低异位内膜VEGF,MMP-2(P＜O.05).CNR组用药后1小时,卵巢达到正常对照组血流速度,2小时后超过正常对照组(P＜0.05),自体相比异位病灶微循环血流亦明显增加(P＜0.05).CNR组上调EMT大鼠血清IL-2、下调IL-IO含量,外周血中CD3,CD4,CD4/CD8上升,CD4+ IL-4+下降,CD4+IFN-Y与CD4+ IL-4比值上升(P＜0.05).CNR组上调异位内膜中caspase-3表达,下调survivin表达(P＜0.05);体外细胞试验bcl-2/bax测定结果亦得到验证.TUNEL法测定细胞凋亡指数(AI)亦增高(P＜0.05)。结论:CNR依据EMS“肾虚血瘀”病机的特点,遵循辨证与辨病相结合的原则,兼容多年之潜心研究而成.毒理实验证实临床用药的安全性.三种治疗方案研究显示,CNR临床防治EMS腹腔镜术后复发与孕三烯酮、达菲林疗效相近似,但是CNR在不良反应,提高妊娠率方面优于孕三烯酮、达菲林治疗.动物实验发现CNR能调节EMS大鼠微循环功能、改善异位内膜组织局部微环境中的蛋白分子异常表达,调控细胞凋亡程序,恢复EMS模型大鼠紊乱的细胞免疫功能.初步证实CNR多层面、多靶点作用机制,为CNR临床推广应用提供了实验依据.