大头茶属植物DNA提取方法比较和ITS-PCR体系的建立

摘要

本研究以天堂果和黄药大头茶为实验材料,通过比较试剂盒法、改良CTAB法和改良SDS法对大头茶总DNA提取效果的影响,最终确定改良CTAB法为较佳提取方法.分析不同DNA模板用量对扩增反应的影响,建立了适合大头茶ITS-PCR反应体系为:模板DNA60ng、Mix15μl、正反引物各1μl,总体积30.0μl,并通过梯度PCR仪确定最佳退火温度,研究结果表明:PCR扩增程序为:94°C预变性5min;94°C变性30s,53.7°C退火60s,72°C延伸60s,共35个循环;72°C延伸5min,4°C保存.本研究采用该体系对其进行扩增,研究结果表明扩增的条带清晰,叮用于大头茶属植物的进一步研究.