对小孔径PLGA支架进行软骨细胞接种时方法的选择

摘要

目的:比较负压法、注射法、振荡法对50-100μm孔径的小孔径PLGA支架进行软骨细胞接种的接种效果.rn 方法:分离培养新西兰大白兔肋软骨细胞至第2代,使用纤维蛋白原溶液混悬细胞,采用负压法(A组)、注射法(B组)、振荡法(C组)(n=9)对50-100μm的小孔径PLGA支架进行软骨细胞接种.接种48h后,Hoechst 33258法检测支架内的DNA含量;硬组织切片、DAPI染色观察支架内的细胞分布.接种含有FITC的无细胞纤维蛋白原,观察凝胶分布.7d后,沿支架矢正中线切开,扫描电镜观察支架表面以及内部的细胞形态;部分支架(n=3)植入裸鼠皮下,2个月后取出做石蜡切片,进行甲苯胺蓝、Ⅱ型胶原免疫组织化学法染色,观察体内成软骨情况.rn 结果:A组DNA含量为657.32±89.68 ng/mg,B组755.79±80.50 ng/mg，C组650.18±106.33 ng±mg,各组之间差异无统计学意义(P＞0.05);DAPI染色结果显示B组细胞分布较A组和C组均匀;各组的纤维蛋白凝胶都均匀分布在支架内;扫描电镜结果显示A,C组外周细胞较B组多，而支架内部的孔隙内仅B组可见细胞粘附;石蜡切片染色结果显示B组支架内软骨基质和Ⅱ型胶原分布范围较A组和C组广，且比后两者均匀。rn 结论:对50-100μn的小孔径PLGA支架而言，注射法是一种快捷、高效的细胞接种方法。