滤泡辅助性T细胞促进IgAN患儿IgA抗体类别转换及Gd-IgA1生成

摘要

目的:探讨滤泡辅助性T细胞(Tfh)对IgAN患儿IgA抗体类别转换及半乳糖缺乏IgA1(Gd-IgA1)生成的作用.方法:(1)20例初治未用药IgAN患儿,34例免疫抑制剂治疗IgAN患儿纳入研究,22例正常儿童作对照.流式细胞术检测外周血Tfh和淋巴细胞膜表面mlgA的表达,RT-PCR检测淋巴细胞IgA恒定区基因CHα1和CHα2表达水平;(2)磁珠分选初治未用药IgAN患儿及对照组外周血Tfh和初始B细胞(Na(i)veBcells, NB)共培养,RT-PCR检测基因AID、Bcl-6、Blimp-1、TGF-β1、IL-21、Iα1Cα1(IgA1)、Iα2Cα2(IgA2)、Ir3Cr3(IgG3)、IgM,IgG和IgA恒定区基因(CHμ,CHr,CHα1,CHα2)动态表达情况.流式细胞术、激光共聚焦显微镜检测mlgA的表达变化.(3)elisa检测血清及共培养体系上清液IgA,Gd-lgA1,Tfh细胞因子IL-21和TGFβ1的表达.结果:(1)未用药组患儿外周血Tfh为(19.87±1.00)%，显著高于免疫抑制剂治疗组(13.87±0.83)%及对照组(10.28±0.68)%,P＜0.001;mIgA(13.21±0.85)%显著高于对照组(8.75±0.32)%, P＜0.0001;外周血淋巴细胞IgA基因(CHα1,CHα2)表达高于对照患儿，同时血清细胞因子IL-21、TGF-β1分别为102.2±9.5(pg/ml),80392±2274(pg/ml)，明显高于对照74.38±2.6(pg/ml),29384±1828(pg/ml),P均＜0.050 (2)Tfh与NB共培养体系中TGF-β1,IL-21,Bcl-6,Blimp-1,AID，Iα2Cα2,Iα1Cα1,CHN,CHα1,CHα2,CHy均在第6小时最强，并随时间减弱;IgA肾病患儿共培养体系第9天mIgA.IL-21，TGF-β1及IgA分别为8.16±0.07(%),15.17±1.6(pg/ml),1059±64.86(pg/ml),4.2±1.1(pg/ml),显著高于对照组5.1±0.77(%),5.5±1.3(pg/ml),528±36.05(pg/ml),1.8±0.9(pg/ml)(P均＜0.05)。共聚焦显示Tfh促进NB细胞表达IgA作用强于单独下角细胞因子TGF-β1, IL-21及IL-4。(3)IgAN患儿外周血血清IgA,Gd-IgA1分别为2881±611(ug/ml),2573±540.2(U/ml)，高于正常儿童2337±428(ug/ml),1021±132.5(U/ml)，其中Gd-IgA1水平显著升高(P=0.03);IgAN患儿共培养体系上清液IgA,Gd-IgA1分别为4.82±0.39(ug/ml),4.04±0.32(U/ug)显著高于对照组、NB与IL-21,TGF-β1、IL-4培养组，P值均＜0.001。结论IgAN患儿外周血Tfh,mlgA,IgA基因，血清及共培养上清液IgA,Gd-IgA1,IL-21,TGF-β1表达上调。Tfh细胞具有促进NB细胞发生IgA抗体类别转换，促其向分化为IgA,Gd-IgA1分泌细胞分化的作用，在这一诱生过程中Tfh细胞可能通过分泌细胞因子IL-21,TGF-β1等发挥重要作用，免疫抑制剂可能通过抑制Tfh而缓解疾病。