Toll样受体2和4在大鼠心肌缺血/再灌注损伤模型中的动态表达

摘要

目的：通过观察大鼠心肌组织缺血/再灌注Toll样受体2和4及相关炎性因子mRNA及蛋白质的表达,探讨TLR2和TLR4的相互关系及各自在心肌缺血/再灌注损伤中的作用.方法：雄性Wistar大鼠根据再灌注时间不同分为7组,每组6只,建立大鼠心肌缺血再灌注模型.再灌注达到预期时间后,原位结扎前降支后,从右颈总动脉注入约1.5mL酞菁蓝溶液,立即剪下心脏,进行TTC染色.雄性Wistar 大鼠随机分为缺血/再灌注组和假手术组,每组42只,在不同再灌注时间点处死大鼠,取下心脏并切成2mm厚切片.实时定量聚合酶链式反应检测TLR2及TLR4mRNA水平.逆转录聚合酶链式反应测定IL-6和MCP-1的mRNA水平.免疫组化检测TLR2、TLR4及TNF-α蛋白质表达情况.结果：(1)肌组织染色结果:随再灌注时间的延长，心肌梗死范围逐渐增大，在再灌注2h时达峰值后一直稳定在平台期，再灌注7d时左心室游离壁显著变薄，室间隔明显增厚。(2)HE染色结果:在再灌注早期，sham组心肌组织形态未见明显改变，而I/R组心肌结构均有不同程度损伤，在复灌7d时可见心室重塑，左室壁厚度明显变薄，大量成纤维细胞替代原有的心肌细胞。(3)免疫组化结果:与sham组相比，TLR2和TLR4的蛋白水平均有升高，到再灌注4h时达高峰，随后逐渐下降，至第7d时有再次升高趋势，但与24h组比较差异无统计学意义。TNF-a蛋白从缺血/再灌注1h起就有升高，在再灌注6h达高峰之后有小幅度下降。结论:在心肌缺血/再灌注早期，心肌组织中TLR2和TLR4基因及蛋白水平迅速上调，早期促进下游炎症因子IL-6和TNF-a的产生造成心肌结构的损伤。在再灌注后期，TLR2和TLR4的再次升高可能使得晚期炎症因子MCP-1的表达增加，从而损伤心肌结构及功能，导致心肌重塑。