大黄鱼Caspase-3分子克隆及特征分析

摘要

Caspase3，是半胱氨酸-天冬氨酸蛋白酶家族的一个成员，在细胞凋亡过程中起着十分关键的作用。我们从大黄鱼中克隆到Caspase-3的同源物。经分析，大黄鱼Caspase-3(Lyccasp3)基因全长2222bp，包含一个长度为858bp的开放阅读框，编码285个氨基酸。Lyccasp3表现为Caspase-3保守的结构特征，包括两个结构域，大亚基和小亚基。已知某些氨基酸对Caspase-3的催化中心和结合位点是非常重要的，而且Lyccasp-3也存在一个五肽的QACRG motif活性位点。重组表达Lyccasp3表现出明显的蛋白水解活性。Lyccasp3在检测的八个组织中属于组成型表达，然而在不同组织中表达水平有所不同。Real-time PCR结果表明，在脾肾中，经poly(I：C)和灭活的三联疫苗刺激后，Lyccasp3的转录水平迅速上升．另外，蛋白水解活性实验表明，Lyccasp3的酶活性在这两个被刺激的组织中是上调的。在鱼经过poly(I：C)和灭活的三联疫苗刺激后，脾肾中Lyccasp9的活性是升高的，所以我们认为在大黄鱼的脾肾中，Lyccasp3是被Lyccasp9激活，并且在刺激后通过内源性细胞凋亡执行细胞凋亡。