中国沙棘子叶原生质体游离及其膜片钳全细胞记录研究初报

摘要

首次报道了适合膜片钳实验的耐盐木本植物中国沙棘子叶原生质体的游离条件，即取当天脱壳的子叶，放入渗透势为0.88M，pH为5.8，酶液组分为1.0％cellulase R-10、0.05％Pectolyase Y-23、0.15％MacrozymeR-10、O.1％Hemicellulase、0.1％BSA、0.1％PVP-40、2mM CaCl2、10mMMes和5 mM Vc的溶液中，在26°C、黑暗条件下，静置4h。并且利用Multclamp 700B放大器和Clampex 9.2软件，记录到了该原生质体质膜全细胞内向K+通道电流(-459.137pA及-290.527pA)和非选择性阳离子通道的外向电流(8.036pA)。另外，我们发现荧光增白剂VBL可用于观察原生质体表面残余的细胞壁，并用于鉴定原生质体质膜能否与玻璃微电极管尖端形成高阻封接，前提是原生质体质膜未受到严重损伤。这为沙棘属木本植物细胞电生理特性及其耐盐机制关系的研究奠定了基础。