Ⅰ型鸭肝炎病毒SG株的分离鉴定及全基因组序列测定与分析

摘要

自2007年12月山东寿光某爆发Ⅰ型鸭肝炎养鸭场分离一株Ⅰ型鸭肝炎病毒(DHV-Ⅰ)，命名为SG株,对山东寿光地区的疑似鸭病毒性肝炎的病鸭肝组织进行病原分离，通过鸭胚尿囊腔接种分毒、血凝实验、标准血清中和实验、动物回归实验以及RT-PCR检测对病毒进行鉴定，并在此基础上对该病毒的ELD50和LD50进行了测定。结果表明所分离病毒无血凝性，人工感染12日龄鸭胚和7日龄雏鸭后表现出典型的鸭肝炎病毒致病特征，能被DHV-Ⅰ标准抗血清中和，RT-PCR检测及序列测定为传统的DHV-Ⅰ，其第5代病毒尿囊液对12日龄鸭胚的ELD50为10-5.58/0.2ml，对7日龄雏鸭的LD50为10-4.68/0.2ml。根据已发表序列设计合成9对引物，以SG株DHV-Ⅰ基因组为模板经RT-PCR扩增出9段连续的、相互部分重叠的DNA片段并分别连入T载体进行克隆测序。用DNAstar螯件对测序结果进行拼接，获得了该病毒的全基因组核苷酸序列。比较分析发现，SG株DHV-Ⅰ与其他传统DHV-Ⅰ毒株在同一进化分支上，而与DHV-Ⅰ变异株的进化分支距离较远，确证SG株为一株DHV-Ⅰ传统强毒。