实时荧光PCR检测牛边缘无浆体方法的建立及应用

摘要

根据牛边缘无浆体表面蛋白4的保守基因序列设计特异引物AMOC9/AMOC5,AMOC10/AMOC12和特异性探针MP,首次建立了牛边缘无浆体的实时荧光PCR检测方法,检测DNA的最低限度为200 fg.对中央无浆体、绵羊无浆体、牛巴贝斯虫、双芽巴贝斯虫、羊莫氏巴贝斯虫、山羊泰勒虫、温氏附红细胞体、东方巴贝斯虫、刚地弓形虫、伊氏锥虫进行检测,无荧光检测信号.用建立的方法检测采自江苏、哈尔滨180份奶牛和肉牛抗凝血,阳性率为8.9％。结果表明,建立的实时荧光PCR检测牛边缘无浆体的方法具有较高的特异性和敏感性,可用于牛边缘无浆体病的流行病学调查、检疫和监测。