谷氨酰胺诱导人单个核细胞热休克蛋白70表达的研究

摘要

目的:探讨经内毒素(LPS)刺激不同时间及不同浓度谷氨酰胺(Gln)预处理后对人单个核细胞(PBMC)热休克蛋白70(HSP70)表达的影响.方法:取健康志愿者新鲜外周血滤过的血盘,用生理盐水按1:1稀释血液,用Ficoll-泛影钠(Ficoll-Hypaque)密度梯度离心法提取出PBMC.得到的细胞置入含4ml培养液的细胞培养瓶中,每瓶数量约为1×107个/ml.所有细胞均在37℃含5％CO2的温箱中培养.实验共分为三个部分,第一部分将10mg/L LPS加入培养液中刺激PBMC不同时间(0、2、4、12、24h),留取细胞和培养液上清,采用western blot方法检测HSP70的表达;第二部分将不同浓度Gln(0、1、4、8、10和15mmol/L)加入培养液中,分别处理2h后,加入内毒素10mg/ml刺激2h,留取细胞和培养液上清,采用western blot方法检测HSP70的表达;第三部分以LPS刺激PBMC 2h后,使用10mmol/LGln分别刺激PBMC0.5h、1h、2h、3h后,提取蛋白,留取细胞和培养液上清,用Westernblot检测HSP70表达的变化.结论:Gln可上调内毒素诱导的单个核细胞HSP70的表达。