蛋白磷酸酶参与豚鼠心肌L-型钙通道run-down机制的研究

摘要

目的:探讨蛋白磷酸酶(protein phosphatase,PP)是否参与豚鼠心肌L-型钙通道的run-down 过程及其可能的作用机制.rn 方法:通过采用胶原酶法分离豚鼠心肌细胞、膜片钳单通道记录手段和蛋白纯化技术,在膜片钳内面向外记录模式下,分别给予PP1 inhibitor-2(PP1组)、fostriecin(PP2A组)和cyclosporinA+cyclophilinA(PP2B组)预处理10分钟后,再给予钙调蛋白(CaM)和三磷酸腺苷(ATP),观察其对L-型钙通道活性和开关动力学的影响.rn 结果:PP1组、PP2A组和PP2B组分别使L-型钙通道的活性恢复到原来的193.94%, 183.41%和7.78%，统计学上均有显著性差异(P＜0.05).PP1组L-型钙通道的快/慢开放时间常数从0.89ms/11.55ms明显延长到2.21ms/21.71ms(P＜0.05)，而快/慢关闭时间常数则从1.19ms/28.17ms缩短到0.81ms/21.67ms;PP2A组L-型钙通道的快馒开放时间常数基本没有改变，即0.81ms/12.22ms到0.92ms/12.04ms，而通道的快/慢关闭时间常数则从2.13ms/24.45ms明显缩短到1.16ms/17.98ms(P＜0.05);PP2B组L-型钙通道的快/慢开放时间常数从1.03ms/10.04ms缩短到0.94ms/3.58ms，且快/慢关闭时间常数也从1.39ms117.40ms缩短到1.30ms112.07ms.rn 结论:PP1和PP2A参与豚鼠心肌L一型钙通道的run-down过程，且因两者对通道开关动力学的影响不同，提示PP1和PP2A在L一型钙通道上可能具有不同的去磷酸化位点。