补肾中药有效成分配伍对骨髓间充质干细胞向成骨分化的影响

摘要

目的:观察4种补肾代表中药淫羊藿、补骨脂、女贞子、何首乌有效成分淫羊藿苷、补骨脂素、齐墩果酸、二苯乙烯苷正交配伍,与2种非补肾中药川芎、黄芪有效成分川芎嗪、黄芪甲苷比较,对大鼠骨髓间充质干细胞增殖及向成骨细胞定向分化的影响.方法: 65只SPF级SD雌性大鼠随机分为正常对照组、阳性转化液对照组、l组、2组、3组、4组、5组、6组、7组、8组、9组(后9组合称补肾配伍组)、非补肾药对照组(黄芪甲苷组、川芎嗪组).通过血清药理学方法,对实验大鼠连续灌胃给药3天后,取材(含药血清),使用各组大鼠含药血清培养骨髓间充质干细胞6天、12天、18天;用茜素红染色对钙化结节进行成骨细胞鉴定;应用MTT法检测骨髓间充质干细胞的增殖率,并用ELISA法检测成骨细胞中碱性磷酸酶的活性表达及含量,用实时定量PCR法检测OSX、RUNX2的基因表达.结果:补肾中药有效成分不同配伍含药血清作用于体外培养骨髓间充质干细胞72h,可以促进骨髓间充质干细胞的增殖.成骨细胞的染色结果:钙化结节可成大片红色,多数分布于细胞密集处.阴性对照则无红色,颜色与之前无改变.成骨细胞ALP活性、含量在6天、12天、18天检测结果中,12天达到高峰值.OSX、RUNX2:Real-Time PCR结果显示补肾中药有效成分能上调OSX、RUNX2的基因表达.结论:补肾中药有效成分配伍能提高骨髓间充质干细胞增殖率,促进骨髓间充质干细胞分化为成骨细胞,补肾中药有效成分能上调OSX、RUNX2的基因表达,其机制与骨髓间充质干细胞的信号通路相关.