抗艰难梭菌B毒素单克隆抗体的制备及特性分析

摘要

目的:制备抗艰难梭菌B毒素的单克隆抗体(mAb)并鉴定其特性.方法:用纯化的艰难梭菌B毒素免疫BALB/c小鼠,将免疫小鼠的脾细胞与骨髓瘤细胞Sp2/0融合,采用间接ELISA筛选杂交瘤细胞.用ELISA检测mAb腹水的效价;用Western blot检测mAb的特异性.结果:得到1株杂交瘤细胞株(3B4),该株细胞分泌的mAb为IgG2a.中和试验表明,该mAb均无中和活性.腹水mAb的效价均在10-4以上.在非变性条件下,PAGE后Western blot的结果显示,该株mAb可与相对分子质量(Mr)为22×104的B毒素产生反应;而在变性条件下,SDS-PAGE后Western blot均显示,可与Mr为4×103的B毒素片段产生反应.结论:该株杂交瘤细胞株能分泌抗艰难梭菌B毒素的特异性mAb,为艰难梭菌B毒素的研究提供了有利的工具.