薯蓣皂苷联合自杀基因对小鼠黑色素瘤细胞及其移植瘤的协同杀伤及机制

摘要

目的:探讨薯蓣皂苷(Dio)对小鼠B16细胞是否通过提高缝隙连接细胞通讯(GJIC)功能,增强自杀基因旁杀伤效应从而对自杀基因系统协同增效. 方法:1.双荧光素示踪流式细胞仪检测GJIC功能;2.Realtime PCR、Western Blot法分析缝隙连接蛋白Cx26,Cx43表达水平;3.MTT法、流式细胞仪检测Dio及其联合自杀基因系统tkGFP/GCV对B16细胞的抑制率、凋亡率;4.Dio及其联合自杀基因系统对小鼠移植瘤的抑制率;5.构建突变型/野生型Cx43质粒,转染B16细胞以促进/抑制GJIC,MTT法检测Dio及其联合自杀基因系统tkGFP/GCV对B16细胞的抑制率. 结果:1.双荧光素示踪法显示Dio明显提高GJIC功能;2.Dio能提高缝隙连接蛋白Cx26,Cx43的mRNA、蛋白表达水平;3.Dio体外对tk/GCV系统有增效作用,联合组的抑制率和凋亡率明显增加,Q值大于1.15说明是协同性,红色荧光蛋白标记的tk阴性细胞凋亡增加,直观说明旁杀伤效应增强;4.Dio体内能明显抑制B16的小鼠移植瘤,与tk/GCV系统联合,抑瘤率高于Dio组和tk/GCV组;5.Dio联合tk/GCV,对转染突变型Cx43的B16,比转染野生型Cx43的B16抑制率明显下降. 结论:薯蓣皂苷体内外对小鼠黑色素瘤有明显抑制效应,联合自杀基因系统有协同增效作用,且可能是通过GJIC机制增强旁杀伤效应而发挥增效作用.